ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИПМех РАН |
||
Объекты исследования: эндо-1,4-β-ксиланаза А Penicillium canescens эндо-1,4-β-ксиланаза E Penicillium canescens эндо-1,4-β-ксиланаза III Trichoderma reesei Целями данной работы являлось увеличение методами белковой инженерии температурной стабильности трех грибных ксиланаз из 10-й семьи гликозидгидролаз (ГГ): эндо-1,4-β-ксиланаз А и Е (XylA и XylE) Penicillium canescens, эндо-1,4-β-ксиланазы III (Xyl3) Trichoderma reesei, а также получение мутантных форм ксиланаз XylA и Xyl3, которые обладают резистентностью к белковым ингибиторам злаков типа XIP. Получен ряд мутантных форм ксиланаз XylA, XylE и Xyl3 с одинарными и двойными а.к. заменами, а также с делециями или вставками в а.к. последовательность ферментов. Определены биохимические параметры гомогенных рекомбинантных ксиланаз. Показано, что ряд а.к. замен приводит к снижению термостабильности ксиланаз XylA, XylE и Xyl3; несколько а.к. замен не повлияли на данный параметр. Получены мутантные формы XylA L18F, XylE Y134R, XylE T196P, XylE Y134R/D248E, обладающие более высокой термостабильностью по сравнению с рекомбинантными формами ферментов дикого типа. Установлено, что XylA L18F проявляет повышенную термостабильность за счет заполнения гидрофобной полости белковой глобулы более объемным неполярным остатком фенилаланина, тогда как замены в XylE Y134R и Y134R/D248E приводят к образованию новых солевых мостиков и, как следствие, к увеличению температурной стабильности. Введение остатка пролина в начало α-спирали в XylE (а.к. замена T196P) оказало небольшое положительное влияние на термостабильность за счет увеличения жесткости третичной структуры фермента. Показано, что вставка дополнительных 5 аминокислотных остатков в пептидную петлю в районе активного центра XylA и Xyl3 позволяет ферментам приобрести свойство резистентности к белковым ингибиторам из злаков типа XIP. Область применения: биотехнология
№ | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
---|---|---|---|---|---|
1. | Заключение диссертационного совета по диссертации | Zaklyuchenie_dissertatsionnogo_soveta_MGU_DenisenkoYuA_FIN.… | 506,5 КБ | 29 декабря 2018 | |
2. | Отзыв официального оппонента | Denisenko_Otzyiv_ofitsialnogo_opponenta_LavrovKV.pdf | 1,1 МБ | 11 декабря 2018 | |
3. | Отзыв официального оппонента | Denisenko_Otziv_Petrenko.pdf | 4,5 МБ | 11 декабря 2018 | |
4. | Отзыв на автореферат | Otzyiv_L_Novozhilov.pdf | 1,1 МБ | 6 декабря 2018 | |
5. | Отзыв на автореферат | Otzyiv_Ermolova.pdf | 860,0 КБ | 17 декабря 2018 | |
6. | Отзыв на автореферат | Denisenko_Otzyiv_KerzhnerMA__1.pdf | 1,4 МБ | 14 декабря 2018 | |
7. | Сведения об официальных оппонентах, включая публикации | Svedeniya_ob_opponentah_DenisenkoYuA.pdf | 2,7 МБ | 13 ноября 2018 | |
8. | Отзыв научного руководителя/консультанта | Otzyiv_nauchnogo_rukovoditelya_DenisenkoYuA.pdf | 1,0 МБ | 13 ноября 2018 | |
9. | Сведения о научном руководителе | Svedeniya_o_nauchnom_rukovoditele_DenisenkoYuA.pdf | 755,6 КБ | 13 ноября 2018 | |
10. | Решение дисс.совета о приеме/отказе к защите | Protokol_No27_DenisenkoYuA.pdf | 646,0 КБ | 13 ноября 2018 | |
11. | Полный текст диссертации | disser_DenisenkoYA.pdf | 5,0 МБ | 15 ноября 2018 | |
12. | Автореферат | avtoreferat_DenisenkoYA.pdf | 1,3 МБ | 15 ноября 2018 | |
13. | Отзыв официального оппонента | Otzyiv_Shvyadasa.pdf | 3,3 МБ | 10 декабря 2018 |