ИСТИНА

Впервые проведено систематическое исследование геномной организации высоко редокс-потенциальных и средне редокс потенциальных лакказ из C.hirsutus, C.maxima, C.zonatus, C.fulvocinerea, A.faginea и P.ostreatus. Установлено, что высоко редокс-потенциальные лакказы содержат 9-10 интронов, причем их длина и положение совпадают. Средне редокс-потенциальные лакказы характеризуются наличием большего числа интронов. Высказана гипотеза о существовании консервативных и вариабельных интронов в генах лакказ базидиомицетов. Установлена локализация трех интронов, характерная только для лакказ базидиальных грибов. Анализ базы данных GenBank подтвердил высказанную гипотезу. Показано, что разделение лакказ на группы в зависимости от величины окислительно-восстановительного потенциала подтверждается особенностями генетической организации. Последовательность гена лакказы из C.hirsutus депонирована в банк данных [GenBank Accession code: ACC43989]. Проведен сравнительный анализ аминокислотных остатков в активном центре Т1. Показано, что на редокс-потенциал может влиять наличие в положении 206 остатков Asn аспарагина или Asp аспартата, а так же наличие водородной связи между остатками глутамата Glu460 и серина Ser113 (нумерация остатков приведена по структуре лакказы C.hirsutus). Показано, что основные структурные отличия между высоко и средне потенциальными лакказами связаны с особенностями третичной структуры фермента - петлями, формирующими вход в субстратсвязывающий карман. Результаты сравнительного исследования генетической организации генов высоко и средне редокс-потенциальных лакказ очень важны для поиска штаммов продуцентов высоко потенциальных лакказ. Разработанные методы клонирования лакказ с хромосомной ДНК, являются быстрыми методами оценки типа лакказ (высоко, средне потенциальные), применимыми к широкому кругу базидиальных штаммов продуцентов. Проведенное исследование геномной организации лакказ является основой для проведения экспериментов по белковой инженерии данных ферментов.