ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИПМех РАН |
||
1. Впервые получены структуры низкого разрешения ДНК-метилтрансферазы SsoII и ее комплекса с 15-звенным ДНК-дуплексом, содержащим участок метилирования, в присутствии S-аденозил-L-гомоцистеина. ДНК-метилтрансфераза SsoII является мономером в апо-форме и в комплексе с метилируемой ДНК. Показана компактизация молекулы белка при связывании с ДНК-субстратом. 2. Экспериментально доказано, что ДНК-метилтрансфераза SsoII взаимодействует с регуляторным участком в составе межгенной области системы рестрикции–модификации SsoII с образованием комплекса, состоящего из двух молекул белка и одного ДНК-дуплекса. В этом комплексе остаток Cys142 каталитического центра ДНК-метилтрансферазы SsoII сближен с ДНК, фланкирующей регуляторный участок. 3. Установлено, что делеционный мутант, представляющий собой N-концевую область SsoII-подобных ДНК-метилтрансфераз, сохраняет ярко выраженную вторичную структуру и способен специфически связывать ДНК, содержащую регуляторный участок. Продемонстрирована высокая подвижность линкера, соединяющего N-концевую область ДНК-метилтрансферазы SsoII (аминокислотные остатки 1–71) и область этого белка, ответственную за метилирование. 4. Впервые показано, что метилтрансферазная и регуляторная активности SsoII являются взаимоисключающими: комплексообразование этого белка с регуляторным участком предотвращает его связывание с участком метилирования. Эффективное метилирование клеточной ДНК обеспечивается метилтрансферазой SsoII за счет большей скорости связывания с участком метилирования и за счет значительного избытка участков метилирования относительно регуляторных участков.