ИСТИНА

Проведено экспериментальное и теоретическое исследование механизма действия многосубстратного бифункционального фермента простагландин H синтазы (PGHS). Показано, что зависимость скорости циклооксигеназной реакции от концентрации арахидоновой кислоты не линеаризуется в двойных обратных координатах. Показано, что в механизмах циклооксигеназной и пероксидазной реакций присутствуют необратимые стадии между пунктами донирования субстратов. Показано, что кинетические закономерности катализа PGHS могут быть объяснены в рамках двумерной кинетической модели для многосубстратных бифункциональных ферментов. Определены условия применимости квазистационарного приближения и определены экспериментально наблюдаемые характеристики для катализа и инактивации. Разработан метод определения константы инактивации из интегральной кривой в условиях истощения по субстрату. С помощью масс-спектрометрических исследований показано, что масса инактивированного в результате катализа PGHS больше массы нативного фермента.