ИСТИНА

Способ сокультивирования iPS-EC клеток, перицитов и астроцитов для формирования клеточной модели гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), в котором перициты засевают на нижнюю поверхность мембраны, покрытой внеклеточным матриксом, в плотности 2,5*105 клеток/см2, в полной питательной среде DMEM+10% FBS, ставят на 2 часа в CO2-инкубатор для прикрепления клеток, меняют среду на ЕС питательную среду, инкубируют еще 24 часа, незрелые (Immature) iPS-EC клетки засевают на слой из перицитов в отношении 1 лунка 6-луночного планшета с незрелыми iPS-EC клетками на 24 мембранные вставки 96-луночного планшета в ЕС питательной среде с добавлением bFGF и ретиноевой кислоты, дают клеткам прикрепиться в течение 2 часов в СО2-инкубаторе, после чего переворачивают мембранные вставки в лунках дном вниз и засевают астроциты на верхнюю (внутреннюю) сторону мембранной вставки в плотности 2,5*105 клеток/см2 в ЕС питательной среде с добавлением bFGF и ретиноевой кислоты и инкубируют 24 часа в ЕС питательной среде с добавлением bFGF и ретиноевой кислоты, через 24 часа меняют среду на ЕС питательную среду без добавок, инкубируют еще 24 часа, при этом используют клетки микроваскулярного эндотелия головного мозга человека, дифференцированные из iPS клеток линии IMR90-4, иммортализованные перициты головного мозга человека и иммортализованные астроциты человека.