![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Формула изобретения 1. Иммуногенная композиция, включающая (i) прайм-компонент, состоящий из рекомбинантных псевдоаденовирусных частиц: частиц, несущих ген tul4 Francisella tularensis с последовательностью SEQ ID NO 1, частиц, несущих ген fopA Francisella tularensis с последовательностью SEQ ID NO 3, и частиц, несущих ген dnaK Francisella tularensis с последовательностью SEQ ID NO 5, при этом указанные гены оптимизированы для экспрессии в эукариотических клетках, и/или (ii) бустерный компонент, включающий рекомбинантные белки: белок DBD-Tul4 с последовательностью SEQ ID NO 16, молекулярной массой 30,0 кДа; белок 6-His-FopA с последовательностью SEQ ID NO 18, молекулярной массой 40,5 кДа; белок DnaK-6His с последовательностью SEQ ID NO 20, молекулярной массой 70,4 кДа, а также содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. 2. Иммуногенная композиция по п. 1, где указанная композиция представляет собой вакцину, индуцирующую иммунный ответ против Francisella tularensis. 3. Иммуногенная композиция по пп. 1 и 2, где указанная композиция используется для индукции специфического клеточного и гуморального иммунитета против Franciella tularensis посредством введения прайм-компонента интраназально и введения бустерного компонента подкожно, дважды с интервалом в две недели. 4. Способ получения иммуногенной композиции по п. 1, включающий получение трех типов псевдоаденовирусных частиц, несущих гены белковых антигенов F. tularensis Tul4, FopA и DnaK соответственно, при этом бактериальный лидерный пептид удаляют и добавляют эукариотический лидерный пептид, каждый ген клонируют в свой плазмидный вектор pSh-PA-ILZ-Fc, куда также клонируют изолейциновый зиппер (ILZ) и Fc-фрагмент антитела IgG2a (Fc), полученные линеаризованные векторы pSh-FopA, pSh-Tul4 и pSh-DnaK смешивают с геномной ДНК рекомбинантного аденовируса Ad5 и котрансформируют в клетки Е. coli штамма BJ5183, полученные плазмиды трансформируют в штамм Е. coli DH5alpha, затем клетки линии 293 трансфецируют линеаризованными плазмидами, лизируют и из полученного лизата выделяют псевдоаденовирусные частицы; получают рекомбинантные белки DBD-Tul4, 6-His-FopA и DnaK-6His, для чего получают плазмиды, содержащие синтетические ДНК с последовательностями, соответствующими генам, кодирующим белки DBD-Tul4, 6-HisFopA и DnaK-6His, где нуклеотидный состав кодонов оптимизирован для гетерологичной экспрессии в непатогенном лабораторном штамме Е. coli, на основе указанных плазмид TUL4, pFOPA и pDNAK получают штаммы-продуценты Е. coli М15 [pREP4, pTul4], Е. coli M15 [pREP4, pFopA] и E. coli M15 [pREP4, pDnaK] с высокой продукцией рекомбинантных белков DBD-Tul4, 6-His-FopA и DnaK-6HisB тельцах включения (ТВ), дальнейшая очистка всех индивидуальных рекомбинантных белков DBD-Tul4, 6-HisFopA и DnaK-6His производится путем растворения ТВ в денатурирующих условиях и проведения колоночной аффинной хроматографии в денатурирующих условиях на носителях, содержащих в качестве неподвижной фазы декстран (сефадекс) в случае DBD-Тil4 или содержащих иммобилизованный металл (металл-хелатная хроматография) в случае 6-His-FopA и DnaK-6His, с последующим удалением денатурирующих агентов из раствора белков, на основе полученных псевдовирусных частиц и белков готовят композицию, содержащую либо псевдовирусные частицы, либо белки, либо комбинацию псевдовирусных частиц и белков. 5. Способ по п. 4, где псевдовирусные частицы и белки подвергают лиофильной сушке.