ИСТИНА

Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмидная ДНК pET-32a/TβRII. Плазмида состоит из BglII/HindIII-фрагмента ДНК плазмиды рЕТ-32а, содержащего lacI-промотор E.coli, T7 промотор, Trx·Tag кодирующую последовательность, His·Tag кодирующую последовательность, S·Tag кодирующую последовательность, T7 терминатор, lacI-кодирующую последовательность, bla-кодирующую последовательность, последовательность f1 участок ori инициации репликации, а также BglII/HindIII фрагмента гена, кодирующего ДНК синтетического гена TβRII. Представлен штамм бактерий Escherichia coli BL21 (DE3)/pET-32a/TβRII - продуцент слитного белка тиоредоксин/TβRII. Предложен способ выделения целевого белка TβRII человека. Растворимую фракцию цитоплазматических белков выделяют из штамма-продуцента Escherichia coli BL21(DE3)/pET-32a/TβRII. Проводят хроматографическую очистку с последующей ренатурацией слитного белка тиоредоксин/ TβRII. Далее белок инкубируют в течение 72 часов при 4°С в буфере, содержащем 0.5 М аргинина, в присутствии окисленного и восстановленного глутатиона в соотношении 1:50 мМ соответственно. Затем проводят диализ, расщепление каталитической субъединицы рекомбинантной энтеропептидазой и очистку целевого белка TβRII от тиоредоксина. Изобретение позволяет получать повышенный выход высокоочищенного TβRII белка человека с нативным N-концом (140 мг с одного литра культуры клеток). 3 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.