ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИПМех РАН |
||
Целью стажировки является получение новых данных, необходимых для разработки фундаментальной проблемы – формирования в эволюции одной из крупнейших групп живых существ – заднежгутиковых, объединяющей грибов, животных, микроспоридий и некоторые группы протистов. В рамках данной проблемы основное внимание будет уделено переходу в пределах заднежгутиковых к грибной организации. Указанная цель будет решаться сравнительным изучением генов, кодирующих компоненты аппарата транскрипции, трансляции и цитоскелета у низших грибов, микроспоридий и других заднежгутиковых. Основанием для выполнения предполагаемой работы является обнаружение двух уникальных (отсутствующих в других лабораториях) и ключевых в рамках решаемой проблемы видов: низшего грибоподобного организма Amoeboaphelidium protococcarum, паразита одноклеточных водорослей, обладающего, в отличие от всех известных грибов, амебоидной активностью на определенных стадиях жизненного цикла, и Amphiamblys sp., систематически обособленного представителя микроспоридий, гиперпаразита (внутриклеточного паразита паразитических одноклеточных - грегарин).
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 25 апреля 2011 г.-25 октября 2011 г. | Научная работа Мирзаевой Гулнары Саидарифовны из Республики Узбекистан, Институт зоологии АН РУз, г. Ташкент, в НИИ ФХБ имени А.Н.Белозерского МГУ, г. Москва. Сравнительное изучение генов, кодирующих компоненты аппарата транскрипции, трансляции и цитоскелета у низших грибов, микроспоридий и других заднежгутиковых |
Результаты этапа: В рамках стажировки, согласно предварительному плану, стажером были проведены экспериментальные работы по амплификации и определению первичных структур генов низших представителей заднежгутиковых Amoeboaphelidium protococcarum и Amphiamblys sp. Первоначально с помощью дифференциального центрифугирования были разделены клетки хозяина – зеленой водоросли, и покинувшие хозяина амебоидные зооспоры паразита – Amoeboaphelidium protococcarum. Были подобраны режимы центрифугирования, обеспечивающие максимально эффективное разделение клеток. Эффективность разделения контролировали микроскопически. Из зооспор была выделена геномная ДНК. С помощью известных универсальных и сконструированных для настоящей работы специфических праймеров методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) были амплифицированы фрагменты генов 18S рРНК и 28S рРНК, а также генов, кодирующих белки: субъединицы РНК-полимеразы II (RPB1 и RPB2), фактора элонгации 1-альфа (EF1A), бета-тубулина. Продукты ПЦР были клонированы в плазмидном векторе, нуклеотидные последовательности рекомбинантных плазмид определены, и среди них с помощью программы BLAST отобраны плазмиды, несущие фрагменты генов хозяина и генов паразита. Последние были собраны (ассемблированы) для проведения дальнейшего анализа. Данные о нуклеотидных последовательностях генов и предсказанных аминокислотных последовательностях низшего грибоподобного организма Amoeboaphelidium protococcarum получены впервые. Был проведен филогенетический анализ полученных последовательностей, который выявил базальное положение Am. protococcarum относительно грибов, включая низшие хитридиевые грибы. Учитывая в совокупности данные по морфологии и ультраструктуре Am. protococcarum, показывающие его промежуточное положение между амебами нуклеариями и низшими грибами, сведения по образу жизни, близкому к таковому низших хитридиевых грибов, и результатов анализа молекулярных данных, устанавливающих филогенетическое положение этого организма, реконструирован жизненный цикл и набор признаков предка грибов, экологические условия его существования, а также разработан эволюционный сценарий формирования грибной организации. Из тотальных препаратов, содержащих фрагменты геномной ДНК хозяина – грегарины Ancora sagittata и гиперпаразита микроспоридии Amphiamblys sp. методом полимеразной цепной реакции с набором универсальных праймеров амплифицирован протяженный фрагмент гена бета-тубулина, кодирующего один из белков цитоскелета. Высокополимерный продукт ПЦР очищен в агарозном геле, клонирован в плазмидный вектор, нуклеотидная последовательность клонированных фрагментов определена методом Сэнгера. Отмечен высокий уровень отличий определенной последовательности от других известных последовательностей бета-тубулина. На дендрограммах, построенных методом максимального правдоподобия, она группируется с последовательностями бета-тубулинов других микроспоридий, располагаясь в основании кластера. Филогенетический анализ выявляет связь кластера бета-тубулинов грибов и микроспоридий, что поддерживает гипотезу, рассматривающую последних в качестве высоко специализированного таксона в рамках грибной линии эволюции. По результатам стажировки опубликованы тезисы доклада на международной конференции и подготовлена к публикации одна статья. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".