![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Экспериментальный и теоретический анализ особенностей локальных межклеточных взаимодействий: (1) на верхушках растущих вегетативных гиф мицелиального гриба Neurospora crassa; (2) на модельной клеточной системе с использованием культивируемых макрофагов; (3) на трансформированных клетках эмбриональных фибробластов крысы в сравнении с клетками гепатом.
(1) С помощью анализа изображений флуоресцентных маркеров Calcofluor white и DAPI на живых и фиксированных препаратах получены данные о параметрах удлинения, септирования, ветвления и распределения ядер при росте изолированных верхушек вегетативных гиф Neurospora crassa, в том числе в среде с дефицитом глюкозы. Результаты работы доложены на XXII Международной конференции «Математика. Компьютер. Образование» (26-31 января 2015 г. Пушино–на–Оке) и подготовлены к журнальной публикации. (2) На модельной клеточной системе с использованием культивируемых макрофагов IC-21 показано угнетающее действие бериллия (Ве2+) на фосфатидилсерин-зависимый фагоцитоз. Нарушение фагоцитоза апоптозных клеток в присутствии Ве2+ может быть одним из механизмов бериллиоза. Результаты представлены на Международной конференции «Рецепторы и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2015) и на Международном Фрумкинском симпозиуме (Москва, 2015 г.). Работа проводится совместно с Институтом молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН и Институтом физической химии и электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН. (3) Совместно с лабораторией канцерогенных веществ РОНЦ им. Блохина исследовано влияние канцерогенных полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) на проницаемость межклеточных щелевых контактов (МЩК) в трансформированных клетках эмбриональных фибробластов крысы в сравнении с клетками гепатом. Показано, что бенз\а\пирен (БП) является универсальным ингибитором МЩК независимо от типа исследованных клеток - снижение проницаемости МЩК до 10% от исходного значения через 1 час и до нуля через 24 часа.. 3-метилхолантрена (МХ) действует на МЩК фибробластов в два раза слабей, чем на клетки гепатом, что может говорить о специфичности промоторного действия ПАУ.
госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию) |
# | Сроки | Название |
3 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Локальные межклеточные взаимодействия |
Результаты этапа: | ||
4 | 1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. | Локальные межклеточные взаимодействия |
Результаты этапа: На данном этапе работы: Получены данные в пользу модуляции фагоцитозной активности холестерин-связывающими пептидами. Планируется продолжить исследования для повышения статистической достоверности эффектов. Получены данные о модуляции межклеточной связи с холестерин-секвестрирующим агентом метил-бета-циклодекстрином и холестерин-связывающим пептидом VLNYYVW. Планируется продолжить исследования для повышения статистической достоверности эффектов. Сформулировано предположение о возможной управляющей роли продольного электрического поля, известного для переднего конца гифы N. crassa [Slayman, Slayman, 1962; Potapova et al., 1988] в создании структурно-молекулярной “машины удлинения”, обеспечивающей верхушечный рост гифы N. crassa. | ||
5 | 1 января 2017 г.-31 декабря 2017 г. | Локальные межклеточные взаимодействия |
Результаты этапа: Были продолжены исследования регуляции фагоцитозной активности холестерин-связывающими петидами в условиях клеточной культуры. Проведен анализ данных о параметрах удлинения, септирования, ветвления и распределения ядер в изолированных верхушках вегетативных гиф Neurospora crassa, растущих при дефиците ресурсов, с позиций ранее разработанных представлений об электрической гетерогенности верхушечного ансамбля клеток. (1)Полученные данные свидетельствуют о модуляции фагоцитозной активности холестерин-связывающими пептидами. По материалам работы готовится публикация. (2)То, что в условиях серьезной метаболической нагрузки, связанной с заменой источника углерода, поддерживается структурная упорядоченность на верхушке растущей гифы, привлекает пристальное внимание к выяснению механизмов самоорганизации внутриклеточных структур в локальном межклеточном ансамбле переднего конца гифы. Мы полагаем, что уникальные свойства разработанной нами экспериментальной модели помогут на примере N. crassa приблизиться к пониманию пока не разрешенных вопросов о деталях внутриклеточных и межклеточных взаимодействий при ВР. | ||
6 | 1 января 2018 г.-31 декабря 2018 г. | Локальные межклеточные взаимодействия |
Результаты этапа: I. Согласно плану на 2018 год получены новые экспериментальные данные о параметрах удлинения, септирования, ветвления и распределения ядер в изолированных верхушках вегетативных гиф Neurospora crassa, растущих при комнатной температуре (22-25 град) и при охлаждении до 15-18 град. Проведен теоретический анализ особенностей морфологии и поведения внутриклеточных структур на изолированном от мицелия переднем конце растущей гифы N.crassa при охлаждении. Материалы работы готовятся к публикации и представлению на тематических научных конференциях. II. Согласно плану на 2018 год, проведены исследования влияния амфипатических пептидов-производных матриксного белка М1 вируса гриппа на фагоцитозную активность культивируемых макрофагов IC-21. Были изучены эффекты синтетических пептидов, соответствующие трем α-спиралям белка M1: LEVLMEWLKTR (α-спираль 3, а.о. 39–49; далее пептид 1); NNMDKAVKLYRKLK (α-спираль 6, а.о. 91–105; пептид 2) и GLKNDLLENLQAYQKR (α-спираль 13, а.о. 228–243; пептид 3). Эти α-спирали экспонируют так называемые холестерин-распознающие аминокислотные последовательности (сholesterol-recognizing amino acid consensus, CRAC), которые могут взаимодействовать с холестерином клеточной мембраны и влиять на холестерин-зависимые процессы. Проведенные эксперименты показали, что все пептиды влияют на взаимодействие клеток IC-21 с неопсонизированными 2-мкм частицами. Наибольшей активностью обладал пептид 2: в присутствии 35 мкМ этого пептида фагоцитозный индекс повышался на 60% от контрольного уровня; метил-β-циклодекстрин (mβCD) (10 мМ) подавлял этот эффект. Пептиды 1 и 3 оказывали слабое угнетающее действие (на 20 и 15% от контроля соответственно) в диапазоне концентраций ~5–10 мкМ. Кривые концентрационной зависимости эффектов аппроксимировались суммой двух кривых Хилла, соответствующих стимулирующей и ингибирующей компонентам. Это может свидетельствовать о наличии по крайней мере двух участков связывания на поверхности клеток. Спектры кругового дихроизма (КД) растворов пептидов подтверждают структурную пластичность пептидов в растворе. В целом, полученные данные указывают на то, что CRAC-содержащие пептиды-фрагменты вирусного белка М1 активны в отношении холестерин-зависимых (и, возможно, зависимых от рафтов) процессов у макрофагов IC-21 и, в частности, могут модулировать взаимодействие фагоцитов с чужеродными частицами. Такие пептиды могут рассматриваться как потенциальные регуляторы активности иммунокомпетентных клеток. Кроме того, модуляция активности макрофагов амфипатическими CRAC-содержащими пептидами-фрагментами вирусного белка М1 указывает на то, что подобные модуляции могут иметь место и при взаимодействии вируса с клеткой, и поэтому такие пептиды могут быть полезны при исследовании этих взаимодействий. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".
№ | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
---|---|---|---|---|---|
1. | 2165-8056-6-135.pdf | 2165-8056-6-135.pdf | 3,6 МБ | 23 декабря 2016 [TVPotapova] | |
2. | BCT486.pdf | BCT486.pdf | 1,5 МБ | 23 декабря 2016 [TVPotapova] | |
3. | potapova_et_al_2016_Cytologia.pdf | potapova_et_al_2016_Cytologia.pdf | 4,6 МБ | 23 декабря 2016 [TVPotapova] | |
4. | OTChET--2016-itog-Prilozhenie.pdf | OTChET--2016-itog-Prilozhenie.pdf | 179,9 КБ | 23 декабря 2016 [TVPotapova] |