Изучение молекулярных основ онкогенезаНИР

.

Источник финансирования НИР

госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию)

Этапы НИР

# Сроки Название
1 1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. Изучение молекулярных основ онкогенеза
Результаты этапа: По итогам выполнения проекта в 2016 году опубликованы 2 статьи, представлены доклады в рамках 3 международных конференций, исполнителями-студентами защищены 4 дипломных работы.
2 1 января 2017 г.-31 декабря 2017 г. Изучение молекулярных основ онкогенеза
Результаты этапа:
3 1 января 2018 г.-31 декабря 2018 г. Изучение молекулярных основ онкогенеза
Результаты этапа: ходе проделанной работы были получены плазмиды, содержащие гены гидовых РНК, для внесения двуцепочечных разрывов в гены MLL и MLLT3. Была проверена возможность внесения двуцепочечных разрывов в гены AML1, ETO, MLL и MLLT3 с помощью системы CRISPR/Cas9. Данные разрывы имели ожидаемую локализацию внутри кластеров точек разрывов, ассоциированных с лейкозогенными транслокациями. Была достигнута главная цель работы: удалось создать клеточную линию LCL_iAML/ETO, в которой после активации доксициклином воспроизводятся двуцепочечные разрывы, приводящие к формированию лейкозогенных транслокаций. Экспрессия Cas9 в этой линии выходит на плато к 24 часам после активации. В то же время первые хромосомные перестройки надежно детектируются с помощью вложенной ПЦР спустя 48 часов с момента активации. Последовательность нуклеотидов в точке транслокации полностью соответствует ожидаемой. Были подобраны условия для определения частоты возникновения хромосомной транслокации AML1-ETO с помощью количественной ПЦР. При работе с полученной модельной линией удается сравнивать влияние ингибиторов белков репарации на частоту транслокаций. Это означает, что полученная линия LCL_iAML/ETO может использоваться для скрининга потенциальных лекарств, снижающих вероятность развития вторичного лейкоза.
4 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. Изучение молекулярных основ онкогенеза
Результаты этапа: Планировалось установить, существует ли отличие в адгезии к белкам внеклеточного матрикса у клеток стабильных линий, экспрессирующих рекомбинантные слитые белки, содержащие в внеклеточном домене различное количество тандемных повторов из области VNTR муцина MUC1 человека. Применялись: анализ клеточной адгезии, проточная цитометрия, конфокальная флуо-ресцентная микроскопия. Результаты: При увеличении числа тандемных повторов в внеклеточной области муцина MUC1 человека сначала равномерное распределение рекомбинантного белка в области контакта клетки со стеклом изменяется на дискретное, а затем происходит формирование компактных кластеров. Адгезия клеток к витронектину и фибронектину не зависит от количества интегриновых рецепторов на клеточной поверхности, уменьшаясь в ряду: HT-29_TR4 → HT-29_TR12. У клеток HT-29_TR20 наблюдается увеличение адгезии к данным белкам внеклеточного матрикса. Интегрин avb3 (рецептор витронектина) кластеризуется в клетках всех проанализированных линий, в то время как интегрин a5b1 (рецептор фибронектина) образует компактные кла стеры только на поверхности клеток HT-29_TR20. Оба интегрина распределены в областях, лишенных молекул MUC1 на поверхности клеток HT-29_TR4, HT-29_TR12 и HT-29_TR20, а распределение данных интегринов на поверхности клеток HT-29_TR- не зависит от локализации рекомбинантного белка. Увеличение числа тандемных повторов в экстрацеллюлярной области муцина MUC1 от 12 до 20 приводит к заметному ослаблению антагонизма муцина MUC1 по отношению к интегрину avb3 при адгезии клеток к витронектину и появлению синергизма по отношению к интегрину a5b1 при адгезии клеток к фибронектину.
5 1 января 2020 г.-31 декабря 2020 г. Изучение молекулярных основ онкогенеза
Результаты этапа: Отработана методика перевода культуры из 3D в 2D, методика подготовки образцов для анализа содержания интегриновых рецепторов в зависимости от продолжительности культивирования. Проведен анализ способности к адгезии к различным белкам внеклеточного матрикса у клеток, выращенных в монослое и в виде сфероидов. Получены сублиний клеточных линий DU145, PC-3, MDA-MB231 и HT-29 методом клональной селекции. Оценена их способность к адгезии к различным белкам вреклеточного матрикса. Проведена оценка и сравнение содержания интегриновых рецепторов в клетках сублиний. Проведено параллельное 2D и 3D культивирование полученных сублиний, подготовлены образцы для оценки и сравнения содержания интегриновых рецепторов. Проанализирована способность к адгезии к различным белкам внеклеточного матрикса у клеток, выращенных в монослое и в виде сфероидов.

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".