Каспаза-2 – новый молекулярно-генетический прогностический фактор контроля эффективности хирургического лечения карциномы яичникаНИР

Caspase-2 - a new molecular genetic prognostic factor for monitoring the effectiveness of surgical treatment of ovarian carcinoma

Соисполнители НИР

НМИЦ АГП им. Кулакова Соисполнитель

Источник финансирования НИР

грант РФФИ

Этапы НИР

# Сроки Название
1 3 сентября 2018 г.-31 декабря 2018 г. Каспаза-2 – новый молекулярно-генетический прогностический фактор контроля эффективности хирургического лечения карциномы яичника
Результаты этапа: Исследован уровень экспрессии гена каспазы-2 и его мутаций, изоформ мРНК в сопоставлении с анализом белков СA-125 и HE4. С помощью методов Вестерн-блота с последующим количественным анализом, секвенирования следующего поколения (next-generation sequencing) и ПЦР в реальном времени проведена оценка уровня каспазы-2 и других проапоптотических факторов в нормальных и опухолевых образцах, полученных от больных с раком яичников.
2 9 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. Каспаза-2 – новый молекулярно-генетический прогностический фактор контроля эффективности хирургического лечения карциномы яичника
Результаты этапа: 1. Прооперированы 60 пациентов, поступивших на лечение в Центр и собраны соответствующие образцы здоровой и патологической тканей, которые были проанализированы в патологоанатомическом отделении. 2. Кроме того, проведен анализ пациентов по различным критериям, включая, возраст, количество рецидивов, акушерско-гинекологический анамнез, наличие экстрагенитальных заболеваний, стадии заболевания, размеру опухоли и состоянию лимфоузлов. Был исследован гистотип полученных образцов от больных и уровень экспрессии маркеров Ki-67 и p53. На основании полученных результатов спланирована программа дальнейших исследований. 3. Был проведен анализ молекулярных механизмов гибели клеточных линий карциномы яичника при обработке их ДНК-повреждающими химиотерапевтическими препаратами. Было показано, что в клетках карциномы яичника происходит активация каспазы-2 наряду с другой инициаторной каспазой-8. При этом обе каспазы формируют независимые друг от друга комплексы.
3 9 января 2020 г.-31 декабря 2020 г. Каспаза-2 – новый молекулярно-генетический прогностический фактор контроля эффективности хирургического лечения карциномы яичника
Результаты этапа: 1. Прооперированы 70 пациентов и собраны соответствующие образцы здоровой и патологической тканей. 2. С помощью разработанного нами метода получения экстрактов из здоровой и патологических тканей пациентов с раком яичника был проведен анализ уровня ряда ключевых белков, отвечающих за процесс апоптоза. Была проведена оценка уровня инициаторных каспазы-2 и каспазы-8, эффекторной каспазы-3, а также субстрата эффекторных каспаз - Поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP), фермента, участвующего в репарации повреждений ДНК. Было показано, что в образцах карциномы яичника происходит снижение уровня каспазы-2 по сравнению с нормальными тканями того же пациента. При этом повышался уровень каспазы-8 и каспазы-3. Было отмечено, что уровень р53 практически не менялся, однако уровень его фосфорилированной формы сильно понижался в патологических тканях. Также было установлено, что содержание как проапоптических белков Bak, Bax, Bim и Bid, так и антиапоптотических Mcl-1, Bcl-xL существенно увеличивалось в образцах злокачественных образований. 3. Анализ маркера повреждений ДНК показал, что и в линиях Сaov-4 дикого типа и нокаутных по каспазе-2 и HeLa дикого типа накопление γН2АХ продолжалось даже после устранения воздействия агента, повреждающего ДНК. Таким образом, при исследовании процесса репарации после обработки клеток Caov-4 и HeLa было обнаружено, что повреждения ДНК, вносимые доксорубицином или цисплатином не репарировались в линии Caov-4 и HeLa дикого типа и нокаутных по каспазе-2. 4. Выполнено таргетное секвенирование экзонов гена CASP2 и фланкирующих интронных последовательностей в интраоперационных биоматериалах большинства пациентов, включённых в исследование. При анализе данных NGS не было выявлено значимого мозаицизма в исследуемых биоптатах. Всего было выявлено 7 полиморфных локусов. В качестве сравнения приведены частоты минорных аллелей этих же локусов по данным проекта Allele Frequency Aggregator, приводящим средние частоты на выборках не менее 1 млн. чел. Для локуса rs4647291 ДИ не включает в себя соответствующее значение проекта ALFA, а для локуса rs4647336 — значение ALFA находится на границе достоверности, полученного по результатам текущего исследования. Стоит отметить, что оба этих локуса расположены в интронах гена CASP2. Тогда как для всех трёх локусов, расположенных в кодирующей части гена, значимых различий с данными ALFA не наблюдается. 5. Выполнен сравнительный анализ уровней мРНК обеих изоформ каспазы-2 — каспазы-2L и каспаз-2S — в ряде образцов здоровых и поражённых участков яичников пациентов с раком яичника. На основании полученных данных были определены соотношения уровней транскриптов в проанализированных образцах биоматериалов. Нормализация уровня мРНК длинной изоформы каспазы-2 по уровню мРНК микроглобулина показал разброс относительных количеств каспазы-2L в образцах яичников женщин, больных раком этого органа, более чем на 2 порядка (и более чем на порядок при исключении крайних значений). 6. Опубликованы три статьи в международных журналах International Review of Cell and Molecular Biology (ИФ= 4.9, Q1), Oncogene (ИФ= 7.9, Q1) и Cell Death and Disease (ИФ= 6.3, Q1).
4 11 января 2021 г.-31 августа 2021 г. Каспаза-2 – новый молекулярно-генетический прогностический фактор контроля эффективности хирургического лечения карциномы яичника
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".