ИСТИНА

Цель исследования – оценить распространённость патогенных вирусов пчёл на территории Российской Федерации и оценить полиморфизм фрагмента геномов циркулирующих вирусов.

In the last decade, large-scale mass death of bees and the so-called collapse of bee colonies have been observed. Since 2006, beekeepers in many countries began to note the disappearance of bee families in their apiaries for no apparent reason. Due to the fact that the productivity of more than one hundred crops depends on the bee population, the problem of collapse of bee colonies goes far beyond beekeeping. It has been shown that the death of families in recent years is almost always associated with the presence of pathogenic viruses in the body of bees. To date, more than two dozen bee viruses have been detected, of which 7 species are pathogenic (DWV, BQCV, KBV, SBV, IAPV, CBPV, ABPV). It is also believed that the main threat to the survival of bee colonies in Russia (as in Europe) remains the ectoparasitic tick Varroa destructor and its ability to transmit pathogenic bee viruses (PBV). A number of foreign studies describe the prevalence of pathogenic bee viruses, but the prevalence of PBV in the Russian Federation is extremely poorly understood. Meanwhile, monitoring of pathogenic viruses is of great importance for studying the biology of PVP and evaluating their relationship with collapse of bee colonies. The project plans the first comprehensive study in Russia of the prevalence of 7 pathogenic bee viruses throughout the Russian Federation, where active beekeeping takes place. During the implementation of the project, large-scale gathering of bees in different regions will be carried out; the degree of infection by ticks was determined and PCR diagnostics of 7 pathogenic viruses of bees was carried out; A phylogenetic analysis of viruses using DNA sequencing of parts of the genome of viruses has been carried out, which will allow us to establish a connection between viruses of different geographical origin. According to the results of the project 1) a large array of data on the prevalence of pathogenic bee viruses in the Russian Federation will be obtained; 2) family ties of the investigated viruses with circulating in the world will be determined; 3) based on the data of molecular phylogenetic analysis, new highly specific PCR test systems will be proposed for the determination of bee viruses circulating in the Russian Federation. The expected results will allow a better understanding of the biology of PBV and assess the possibility of combating them.

В ходе выполнения проекта будут получены следующие результаты: 1) Впервые будут получены данные о распространённости 7 патогенных вирусов пчел (ПВП) на территории Российской Федерации. С использованием поставленных в лаборатории методов (растирание пчел, выделение РНК, постановка реакции обратной транскрипции, ПЦР, гель-электрофорез ДНК) будут получен массив данных о представленности ПВП в различных регионах РФ. По результатам данной части исследования будет подготовлена публикация и глава для диссертации аспиранта. 2) Будут получены уникальные последовательности геномов ПВП, циркулирующих на территории РФ. Будут подготовлены образцы для коммерческого секвенирования, полученные последовательности будут депонированы в общедоступные базы данных нуклеотидных последовательностей. Результаты секвенирования будут использованы для реализации задач 3-4. 3) Будет проведен филогенетический анализ с использованием как общедоступных данных по геномам ПВП, так и полученных нами последовательностей. Будут выявлены наиболее близкие к российским штаммы, оценено родство вирусов. По результатам будет подготовлена публикация и глава в диссертацию. 4) Будут предложены наборы праймеров для эффективного проведения в режиме реального времени ПЦР диагностики вирусоносительства у пчел. Эффективность праймеров будет проверена на уже охарактеризованных образцах. По результатам работы будет подготовлена публикация, возможно заявка на патент, а также глава диссертации.

Работа по анализу вирусов пчел начата 4 года назад. За этот период собрана коллекция образцов из пчелиных семей с пасек западной территории РФ (от КФО до Архангельска), начат сбор образцов на Урале и восточнее Урала. В настоящий момент в коллекцию входят более 500 образцов, из которых уже выделена РНК, получена кДНК и проведён ПЦР анализ (80%) на присутствие ПВП при непосредственном участии аспиранта. Имеется несколько публикаций по исследуемой проблеме.

По результатам выполнения проекта 1) будет получен большой массив данных о распространённости патогенных вирусов пчёл на территории Российской Федерации; 2) будут определены родственные связи исследованных вирусов с циркулирующими в мире; 3) на основании данных молекулярно-филогенетического анализа будут предложены новые высокоспецифичные ПЦР тест-системы для определения вирусов пчёл, циркулирующих в Российской Федерации. Ожидаемые результаты позволять лучше понять биологию ПВП и оценить возможность борьбы с ними.