ИСТИНА

Наработка, включая очистку, рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, предназначенной для сеансов КЭ (ЦР) «Кристаллизатор». Получение глутатионилированной формы рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, включая определение эффективности модификации рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, предназначенной для сеансов КЭ (ЦР) «Кристаллизатор». Наработка, включая очистку, шаперонина gp 228 из бактериофага AR9, предназначенного для сеансов КЭ (ЦР) «Кристаллизатор».

As part of the work, it was proposed to use crystal growth under zero gravity during a space experiment to obtain data on the structure of human glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) in the native and glutathionylated state, as well as on the structure of the gp 228 chaperonin from the AR9 bacteriophage. The choice of these objects is due to the fact that glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase plays a central role not only in energy metabolism, carrying out the most important glycolysis reaction, but is also associated with the development of pathologies (Parkinson's and Alzheimer's diseases and others). At the same time, there is still no information on the spatial structure of glutathionylated crystals, possibly due to the difficulty of obtaining crystals suitable for X-ray diffraction analysis under ordinary conditions. Until now, it was also not possible to obtain crystals of a rather complex protein, chaperonin gp 228, from bacteriophage AR9. Information about the structure of this chaperonin is necessary for understanding the evolution of this class of proteins and elucidating their functioning, since chaperonins play an important role in the development of neurodegenerative diseases of an amyloid nature, as well as the first object of research - native and glutathionylated glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.

Наработать и получить в достаточном количестве и с высокой степенью очистки следующие препараты: шаперонин gp 228 из бактериофага AR9; рекомбинантную глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (ГАФД) человека; глутатионилированную форму рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека.

Проведена наработка в необходимых количествах и нужного качества следующих белков: рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, глутатионилированной рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, а также шаперонина gp 228 из бактериофага AR9. Была доказано гомогенность полученных препаратов по данным электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях всех трех препаратов. Была определена удельная активность рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека, которая была близка к значениям, характерным для фермента, выделенного обычными методами из тканей млекопитающих, а также показано, что шаперонин gp 228 из бактериофага AR9 обладает функциональной активностью, стимулируя ренатурацию одного из его субстратов - эндолизина. Изучена кинетика глутатионилирования рекомбинантной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) человека по снижению ее каталитической активности. Таким образом, в ходе выполнения проекта проведены выделение, очистка и характеристика наработанных белков, пригодных для дальнейших исследований по их кристаллизации в условиях КЭ и последующего ретгеноструктурного анализа.