Получение рекомбинантных канальных родопсинов для локализованной экспрессии в нейронах и изучение возбуждающего и тормозного рецептивных полей трансфецированных клеток с целью восстановления зрительных функций дегенеративно поврежденной сетчатки при помощи оптогенетических технологийНИР

The preparation of recombinant channel rhodopsins for the localized expression in neurons and the study of excitation and braking transfected with the receptive fields of cells to restore visual functions in degenerative retinal damaged with optogenetics technologies"

Источник финансирования НИР

Хоздоговор, -

Этапы НИР

# Сроки Название
1 6 декабря 2016 г.-28 декабря 2016 г. Получение рекомбинантных канальных родопсинов для локализованной экспрессии в нейронах и изучение возбуждающего и тормозного рецептивных полей трансфецированных клеток с целью восстановления зрительных функций дегенеративно поврежденной сетчатки при помощи оптогенетических технологий»
Результаты этапа: 1. Выполнен обзор современной научно-технической литературы, затрагивающей научно-техническую проблему, исследуемую в рамках НИР, в том числе обзор научных информационных источников: статьи в ведущих зарубежных и/или российских научных журналах и (или) патенты за период 2010-2015 гг. 2. В ходе выполнения НИР получен ген нового анионного (хлорного) канального родопсина GtACR2. Рекомбинантный ген был встроен по соответствующим сайтам рестрикции в экспрессионный вектор, позволяющий производить трансфекцию нейрональных клеток. Получены экспрессионные плазмидные векторы, содержащие гены катионного ChR2 и анионного GtACR2 канальных родопсинов под контролем специальных якорных последовательностей (мотивов), обеспечивающих локализованную экспрессию обоих канальных родопсинов в нейронах. В качестве якорных использованы такие последовательности, как мотивы анкерина и/или Kv2.1, обеспечивающие соматическую локализацию ChR2, и мотивы PSD95 и/или нейролигина, обеспечивающие периферическую локализацию GtACR2. 3.Определена нуклеотидная последовательность генов канальных родопсинов ChR2 и GtACR2 в составе плазмидных векторов методом ДНК-секвенирования по двум цепям. 4. Отработаны методы трансфекции экспрессионными векторами первичных диссоциированных нейрональных культур, а также методы их последующего электрофизиологического и морфологического анализа. 5. Отработаны методы изучения особенностей возбуждающего и тормозного рецепторных полей нейрональной клетки при помощи световой стимуляции с одновременной внутриклеточной регистрацией активности клетки. 6. Изучены эффективность локализованной трансфекции канальными родопсинами нейрональных клеток и физиологическая активность нейронов, в том числе, их возбуждающего и тормозного рецепторных полей, с помощью электрофизиологических методов.

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".