ИСТИНА

Провести комплекс работ по поддержанию коллекции штаммов-продуцентов Escherichia coli, содержащих плазмиды c генами WSCP, и осуществить наработку, препаративное выделение, очистку апобелков WSCP и сборку на их основе тетрамеров белков BoWSCP (класс IIa) и LvWSCP (класс IIb) со встроенными хромофорами.

Carrying out a complex of works to maintain the collection of Escherichia coli producing strains containing plasmids with WSCP genes, and to carry out the production, preparative isolation, purification of WSCP apoproteins and tetramers assembly of BoWSCP (class IIa) and LvWSCP (class IIb) proteins with built-in chromophores on their basis.

обеспечить сохранность коллекции штаммов продуцентов E.coli, содержащих встроенные плазмиды с генами белков семейства WSCP, выделить апобелки в препаративном количестве, провести самосборку и очистку холоформ WSCP, проверить качество выделенных препаратов электрофоретическими и спектральными методами, а также провести оценку возможности концентрации и доочистки препаратов с использованием центрифужных концентраторов Amicon фирмы Merck с разным диаметром пор.

Исследование белков семейства WSCP, начатое на кафедре молекулярной биологии биологического факультета МГУ в 2017 года совместно с сотрудниками лаборатории экологической и эволюционной биохимии Института биохимии им. А.Н. Баха РАН (ФИЦ Биотехнологии РАН), продолжается в настоящее время по договору № 1-15/22 от 27.06.2022 в рамках гранта РНФ 21-74-20155 от 25.03.2021 (руководитель гранта д.б.н., профессор М.С. Крицкий). В ходе работы по данной теме собрана и обобщена обширная литература (Малеева и др., 2019). Вектора, включавшие последовательности белков WSCP из растений Brassica oleracea и Lepidium virginicum, ранее использованные нами для получения штаммов E. coli-продуцентов белков BoWSCP и LvWSCP, были любезно предоставлены Ph. D. Hiroyuki Satoh (Department of Biomolecular Science, Toho University, Japan), а также Dr. Mara Werwie и Prof. Dr. Harald Paulsen (Institute of Molecular Physiology (IMP), The Johannes Gutenberg University Mainz, Germany).При совместном руководстве Ю.В. Малеевой и К.В. Неверова магистром Ю.Н. Обуховым (2018 г.) и бакалавром Г.А. Ивановым (2020 г.) на кафедре выполнены и успешно защищены выпускные квалификационные работы, где отрабатывались методические подходы для получения и очистки белков этого семейства и их комплексов с хлорофиллами.

Работы по поддержанию коллекции штаммов-продуцентов белков семейства WSCP проводятся с необходимым интервалом, что позволяет сохранить жизнеспособность и стабильность штаммов. Повторное архивирование в настоящее время не требуется. Отработана комплексная методика, оптимизированная на основе методических приемов, предложенных ранее разными авторами, в результате мы можем относительно легко и быстро получать требуемое количество препаратов пигмент-белковых комплексов WSCP высокого качества. Получены препараты хлорофилл-белковых комплексов белков BoWSCP и LvWSCP, исследованные спектральные характеристики которых, как и данные электрофоретического анализа, подтвердили их гомогенность и структурную нативность, а также соответствие результатам, полученным нами и исследователями из других лабораторий ранее. Препараты готовы для дальнейших исследований физико-химических свойств этих водорастворимых хлорофиллсвязывающих белков.