ИСТИНА

Мезенхимные стромальные клетки (МСК) считают важными участниками процессов, связанных с восстановлением структуры и функции ткани после повреждения, в т.ч. при различных заболеваниях человека. МСК активируются при повреждении и принимают участие в заживлении дефектов покровных тканей и восстановлении паренхиматозных органов, а их экзогенная доставка стала одним из наиболее используемых методов в клеточной терапии. При этом вопрос о механизме, за счет которого МСК оказывают положительное влияние на процессы регенерации, по-прежнему остается открытым. Обладая паракринной активностью, МСК вырабатывают широкий спектр цито- и хемокинов, способных стимулировать регенеративные процессы. Также известно, что МСК нарабатывают и белки внеклеточного матрикса, формируя строму, необходимую для восстановления ткани и ее васкуляризации. Настоящий проект направлен на выяснение механизма участия МСК в регенеративных процессах (на примере заживления трофического дефекта кожи) и включает оценку вклада следующих компонентов: 1) секретома МСК, 2) МСК в суспензии (наиболее часто используемых в медицине именно в такой форме), 3) комплексов из МСК с наработанным ими внеклеточным матриксом (т.н. "клеточных пластов"). В ходе проекта также удастся оценить потенциал каждого из исследуемых компонентов в заживлении трофических дефектов кожи, являющихся серьезной проблемой во многих отраслях медицины. В практическом плане в проекте будут получены результаты, касающиеся получения тканеинженерных конструкций без применения химических или ксеногенных полимеров, а также получены данные об их эффективности на модели кожного дефекта.

1) Будут получены результаты исследования продуктов секреции МСК ЖТ мыши, оценена эффективность полученных кондиционированных сред in vitro (миграция, пролиферация клеток и др.). Также предполагается получить результаты сравнительных тестов in vitro, позволяющих оценить эффективность полученных кондиционированных сред по сравнению с МСК ЖТ. Для этой цели в опыта будут использованы МСК ЖТ или продукты их секреции с оценкой степени воздействия на клеточные процессы. Данные результаты позволят подтвердить биологическую активность кондиционированных сред перед их использованием на животных моделях. 2) На культуре МСК ЖТ будет отработана методика сборки клеточных пластов с использованием различных подходов к получения данных тканеинженерных конструкций. В частности, будет оцениваться добавление аскорбиновой кислоты, культивирование на различных форматах планшетов, инкубация в течение длительного (до 21 дня) или короткого (2-4 суток) периода времени и будут получены данные гистологического исследования полученных конструкций, позволяющих сделать вывод о состоятельности отработанных методик и механических свойствах «клеточных пластов» 3) Будут отработаны подходы к моделированию трофического дефекта у мышей линии С57В6 с использованием циклов ишемии-реперфузии, создаваемой с помощью магнитов или пережатия кожной складки согласно одному из протоколов с необходимыми модификациями. 4) В опытах на животных планируется получить данные о динамике гистологических изменений в области трофического дефекта кожи и при его заживлении. Также будут получены данные о базальной (нестимулированной) скорости заживления в контрольной группе и оценены временны рамки модели, необходимые для планирования дальнейших экспериментов на животных и забора материала. Таким образом, по итогам первого года,планируется решить ключевые задачи, касающиеся получения и оценки свойств материалов, необходимых для достижения цели исследования. Будут изучены биологическая активность и свойства кондиционированных сред, содержащих продукты секреции МСК ЖТ, оценены гистологические параметры и эффективность получения тканеинженерных клеточных пластов из этих клеток, а также отработана животная модель, позволяющая оценить влияние данных компонентов и суспендированных МСК ЖТ на процессы регенерации.

исследования в области биологии мезенхимных стромальных клеток (МСК) ведутся более 10 лет. В ходе выполненных работ было показано, что МСК из различных источников обладают ключевой ролью как модулятор и непосредственный участник регенерации тканей при повреждении. Среди ключевых оригинальных достижений, которые обладали мировым уровнем значимости, было доказательство выраженного влияния коморбидных состояний (диабет, ишемических состояний и др.) на паракринную функцию, пролиферацию и дифференцировку МСК. Значительные результаты были достигнуты в области использования МСК для лечения заболеваний человека, были проведены доклинические оценки использования этого типа клеток для создания препаратов (в том числе бесклеточных, на основе продуктов секреции), используемых для реконструктивных манипуляций, лечения ран и ожогов. ФФМ и МНОЦ располагает всем необходимым оборудованием для культуральной, гистологической, молекулярной работы и животных моделей. На базах лабораторий ФФМ, работающих в тесном сотрудничестве более 5 лет, имеются современные конфокальные микроскопы, оборудование для клеточного сортинга (магнитного и FACS), набор реактивов и клеточных линий, при необходимости имеется доступ к современным ЦКП МГУ. Сотрудниками коллектива отработан целый ряд оригинальных животных и клеточных подходов, позволяющих смоделировать ишемические состояния, дефекты кожи различного генеза, воспалительные процессы, оценить влияние молекул и клеток на миграцию, пролиферацию, дифференцировку и выживаемость клеток. Ряд моделей являются оригинальными или представляют собой модификации существующих основных модельных систем. Коллектив ежегодно публикует статьи в международной и национальной научной периодике, ведется активное патентование результатов работы, а междисциплинарный характер подготовки специалистов позволяет решать задачи самого широкого спектра.