ИСТИНА

Целью исследования является получение новых сведений о сочетанном действии природных и синтетических лигандов паттерн-распознающих рецепторов FPR (FPR1 и FPR2), TLR9, TLR4 и RAGE на функциональные ответы нейтрофильных гранулоцитов человека in vitro.

According to WHO, the main causes of death in the world are diseases etiologically associated with inflammatory processes. Discovering of pattern recognition receptors (PRRs) appeared to be the key stage of formation of modern ideas about the regulatory mechanisms of inflammatory processes. These structures recognize and bind antigenic determinants of microorganisms and cellular degradation products, triggering cascades of adaptive mechanisms aimed at maintaining homeostasis. All this explains the interest in PRR agonists and antagonists as active components of immunomodulatory therapeutic agents. The central participants in inflammation of any etiology are neutrophilic granulocytes. Due to the expression of a wide repertoire of PRRs, these cells form the first line of defense against pathogens and are involved in the complex regulation of all types of immune response. However, being pathologically activated in the intravascular environment neutrophilic granulocytes are the most important participants in the development of epithelial and endothelial dysfunctions, chronic and systemic inflammations. Despite the fact that the intrinsic effects of agonists of the vast majority of PRR neutrophilic granulocytes have been studied in sufficient detail, the identification of the main patterns of the combined action of physiological PRR ligands on the functional responses of neutrophils is still an urgent task of fundamental immunology, the solution of which will be able to clarify the pathophysiological aspects of many diseases. Considering the critical role of neutrophils in the formation of the immune response, the study of the effect of synthetic PRR ligands on the pro-inflammatory potential of these cells is a necessary step in any immunopharmacological research. The proposed project is aimed at studying the functional responses (adhesion, phagocytosis, production of reactive oxygen and nitrogen species, apoptosis and NETosis) of neutrophilic granulocytes during combined stimulation of pattern recognition receptors of the FPR (FPR1 and FPR2), TLR (TLR9 and TLR4) families with natural and synthetic ligands. and RAGE. The objective of the project is complex, including the study of the integration of signals mediated by FPR1, FPR2 and TLR9, including when TLR4-signaling is involved; RAGE and FPR; RAGE and TLR9. In addition, oligonucleotide aptamers to the TLR4, TLR9 and RAGE receptors described in the literature will be studied in order to select sequences that have a pronounced immunomodulatory activity against human neutrophilic granulocytes. The vast majority of studies on PRR-dependent signaling in myelocytic cells were carried out on primary cultures and cell lines of monocytes and macrophages or neutrophil-like HL-60 cells. In our experimental models, neutrophils isolated from the peripheral blood of healthy donors will be used, which increases the physiological relevance of the data obtained.

Реализация проекта позволит выявить основные закономерности сочетанного действия физиологических и синтетических лигандов паттерн-распознающих рецепторов, играющих существенную роль в развитии воспалительных процессов, а именно, FPR, TLR и RAGE, на функциональные ответы нейтрофилов человека. Полученные данные восполнят имеющиеся пробелы в представлениях о регуляторной роли PRR нейтрофилов в поддержании гомеостаза, смогут прояснить патофизиологические аспекты многих социально значимых заболеваний. Учитывая критическую роль нейтрофилов в формировании иммунного ответа, изучение действия синтетических лигандов PRR, в том числе, олигонуклеотидных аптамеров, на провоспалительный потенциал этих клеток имеет большое прикладное значение.

Руководитель проекта имеет большой опыт работы с иммунными клетками крови человека, в частности, принимала непосредственное участие в изучении действия сульфатидов и бактерий на апоптоз нейтрофилов; являлась активным участником исследований синтеза лейкотриенов и апоптоза нейтрофильных гранулоцитов под действием CpG-содержащих синтетических олигонуклеотидов, продемонстрировавших важную регуляторную роль низкомолекулярных клеточных медиаторов и показавших, что эффекты CpG-олигонуклеотидов класса A и ДНК-последовательностей, содержащих теломерные повторы, на синтез лейкотриенов опосредованы активаций транскрипционного фактора NF-kB. С участием руководителя проекта получены данные, свидетельствующие о том, что действие CpG-ODN класса А на нейтрофилы сочетает в себе как неспецифический прооксидантный компонент, так и специфический, предположительно, TLR9-зависимый, стимулирующий эффект на синтез оксида азота. Был продемонстрирован регуляторный потенциал лейцин-богатых последовательностей в отношении TLR9-опосредованного сигналинга нейтрофилов и показана модулирующая роль рецептора RAGE. Являлась активным участником исследования олигонуклеотидных последовательностей, содержащих теломерные повторы, благодаря которому было впервые показано, что G-квадруплексные структуры являются регуляторами синтеза лейкотриенов при взаимодействии нейтрофилов с бактериями, благодаря кальций-зависимому потенцирующему влиянию на фагоцитоз. Являлась непосредственным исполнителем в исследованиях, выявивших регулируемое оксидом азота образование физиологически активного соединения 5-оксо-ЕТЕ при взаимодействии нейтрофилов с частицами зимозана и бактериями Salmonella typhimurium и продемонстрировавших способность оксида азота регулировать продолжительность жизни нейтрофилов. Принимала участие в исследовании комплексного действия белка острой фазы церулоплазмина на функции нейтрофилов человека.