ИСТИНА

1. Создание новых генно-инженерных векторов на основе геномов вирусов растений и получение химерных вирусных частиц, несущих чужеродные иммуногенные эпитопы на поверхности вириона, и/или получение вирусоподобных частиц на основе химерных белков вирусов растений, слитых с чужеродными иммуногенными эпитопами, что открывает перспективу производства вакцинных иммуногенов в растениях. 2. Изучение возможности создания наноплатформ для получения вакцинных и диагностических нанокомплексов на основе комплексов структурно модифицированных вирусных и вирусоподобных частиц, полученных при термической обработке нативных фитовирусов (Х-вируса картофеля, вируса мозаики альтернантеры, вируса штриховатой мозаики ячменя). Получение комплексов «наноплатформа-эпитопы патогена» и «наноплатформа – полимер - эпитопы патогена», которые позволят принципиально упростить и ускорить процесс производства безопасных вакцин различной природы 3. Разработка новых модификаций внелабораторных иммунохроматографических методов диагностики вирусов растений и мониторинг вирусных заболеваний сельскохозяйственных культур.

Создание на базе модифицированных вирионов фитовирусов сферических частиц («СЧ-платформ»), экспонирующих антигены патогенов для получения кандидатных вакцин -иммуногенных комплексов «СЧ-антиген». Ранее на основе палочковидных вирионов вируса табачной мозаики (ВТМ) нами был получен новый тип биогенных сферических частиц (СЧ) - платформ (носителей) для создания функционально активных комплексов. Было показано, что СЧ обладают высокой стабильностью и имунногенностью и могут быть использованы в качестве универсальной платформы-адьюванта при создании вакцин. На основе сферических частиц был создан образец кандидатной вакцины против краснухи и проведена наработка препаратов комплекса СЧ – антигены вируса краснухи в количествах необходимых для начала доклинических испытаний За отчетный период в рамках НИОКР «Доклинические исследования вакцины против краснухи, полученной на основе структурно модифицированных вирусов растений в качестве универсальной платформы - адъюванта» в рамках федеральной целевой программы «Фарма-2020» было проведено сравнение иммуногенности кандидатной вакцины со следующими препаратами: свободным тетраэпитопом A гликопротеина E1 вируса краснухи, тетраэпитопом A вместе с наиболее распространенным в клинической практике адъювантом – гидроксидом алюминия (существующей зарегистрированной вакциной против краснухи) и нулевым контролем – стерильным физиологическим раствором. Изучено влияние путей введения лекарственного средства на иммуногенность – внутримышечного и внутрибрюшинного. Результаты исследования показали статистически значимое превышение титров антител у животных при использовании кандидатной вакцины как при внутримышечном, так и при внутрибрюшинном введении. Таким образом, достоверно продемонстрирована высокая иммуногенность вакцины против краснухи, полученной на основе структурно модифицированных вирусов растений в качестве универсальной платформы – адъюванта на животной модели. Разработка доступного иммунохроматографического экспресс-метода для массовой диагностики вирусов растений и мониторинг вирусных заболеваний сельскохозяйственных культур. Исследованы молекулярно-биологические свойства изолятов вируса оспы сливы (ВОС) штамма D, обнаруженных в насаждениях косточковых культур на территории Европейской России. С помощью филогенетического анализа частичных и полных последовательностей их генома показано, что имела место неоднократная интродукция в Россию изолятов этого штамма из стран Восточной и Южной Европы. При анализе полногеномных последовательностей российских изолятов ВОС штамма W обнаружено широкое распространение феномена внутриштаммовой рекомбинации, являющейся важным источником высокой генетической изменчивости изолятов этого штамма. Разработана усовершенствованная методика препаративного выделения вируса оспы сливы, обеспечивающая высокий выход очищенного вируса с полноразмерным белком оболочки. Показано, что среди природных изолятов штаммов C и CR широко распространен универсальный эпитоп с мутацией D94E (94ERDVDAG100), который не распознается моноклональными антителами 5В, использующимися в ИФА при диагностики вируса, что создает потенциальную угрозу получения ложноотрицательных результатов при мониторинге заболеваний растений.. Создание фитовирусов-векторов для использования нетрансгенных растений как фабрик продукции целевых белков и разработка доступного иммунохроматографического экспресс-метода для массовой диагностики вирусов растений С целью разработки диагностической системы ранее был создан агробактериальный вектор, содержащий репликационный и транспортный аппарат эффективно накапливающегося в растениях палочковидного вируса табачной мозаики и ген белка оболочки чрезвычайно плохо накапливающегося в растениях сферического вируса скручивания листьев картофеля (ВСЛК). Показано, что экспрессия этого вектора в растениях приводит к накоплению искусственного сферического химерного вируса картофеля, состоящего из РНК спирального тобамовируса и белка оболочки сферического вируса скручивания листьев картофеля (ВСЛК). Показано, что химерный вирус размножается в зараженном растении в 800 раз эффективнее, чем природый изолят ВСЛК, а антитела к дикому типу ВСЛК узнают химерный вирус с той же чувствительностью, что и природный изолят, что позволяет, эффективно накапливать химерный вирус для иммунизации и получения антисывороток к ВСЛК и снимает ограничения на разработку диагностических систем. С использованием химерного вируса и полученных к нему антител изготовлены экспериментальные диагностические тест-полоски с чувствительностью, достаточной для определения наличия вируса ВСЛК в зараженных растениях. Эти тест полоски в настоящее время проходят испытания и сравниваются с зарубежными коммерческими аналогами.