ИСТИНА

Для придания биосовместимости магнитным наночастицам, а также для увеличения времени их циркуляции в кровяном русле была проведена модификация их поверхности амфифильным пэгилированным полимером. Покрытие содержало полиэтиленгликоль (ПЭГ), карбоксильные группы, что позволило провести конъюгацию наночастиц с антителами. Были получены наночастицы оксида железа в оболочке из олеиновой кислоты со средним диаметром 7±1 нм по методике описанной в литературе (Chun Yu Wang, Jian Ming Hong, Gong Chen, Yu Zhang, Ning Gu //Chinese Chemical Letters. 2010. Vol. 21 P. 179–182). Для стабилизации водного коллоидного раствора частиц было использовано покрытие PMAO-PEG (PMAO-PEG-?-Fe2O3). Модифицированные таким образом частицы образовывали стабильный водный коллоидный раствор (золь). Средний размер частиц, измеренный методом DLS составлял ~160 нм. По данным ПЭМ наночастицы, после модификации амфифильным полимером, собирались в конгломераты, состоящие из ядра, содержащего наночастицы, и гидрофильной «короны» из полиэтиленгликоля. Концентрация железа в образцах составила 0,3 мг/мл. МТТ тест наночастиц PMAO-PEG-g-Fe2O3 показал, что полученные препараты обладают низкой токсичностью по отношению к культурам клеток глиомы С6, клеток рака молочной железы человека MCF7. Для модификации и конъюгации с биомолекулами использовали квантовые точки размером 4,5 нм с экситонным максимумом на длине волны 480 нм и максимумом люминесценции 530 нм. Перед модификацией триамином карбоксильные группы дигидролипоевой кислоты на поверхности квантовых точек необходимо было активировать с помощью EDC. Карбодиимид образует реакционноспособное производное с карбоксильными группами ДГЛК, которое затем легко реагирует с амин-группами линкера. Однако это производное со структурой N’-этил N-диметиламинопропил-о-ацилизомочевины, склонно перегруппировываться в более устойчивый продукт - N’ этил N диметиламинопропил-N ацилмочевину. Для того, чтобы снизить степень этой перегруппировки, к смеси добавляли нуклеофильную добавку - N-гидрокси-сульфосукцинимид (NHSS), который при реакции с N этил N’-диметиламинопропил-о-ацилизомочевиной образует соответствующий сульфосукцинимидный эфир, также активирующий карбоксильную группу ДГЛК, но медленнее гидролизующийся в слабощелочной среде (рН 8). В целях поиска оптимальных условий для осуществления многоцентрового присоединения полиамина к поверхности квантовой точки в ходе эксперимента варьировали три основных параметра: количества EDC, NHSS и амина. C этой целью в ряде экспериментов вместо полиамина использовали азидопропиламин, имеющий более простое строение. Оценку количества введенного амина проводили, осуществляя реакцию CuAAC с красителем Joe, содержащим терминальную ацетиленовую группу. Полученные результаты представлены в таблице 1. Избытки всех реагентов указаны в расчете на 1 нмоль КТ.

Показана высокая эффективность использования реакции SPAAC для получения конъюгатов КТ и биомолекул (олигонуклеотидов). Реакция SPAAC по сравнению с CuAAC наиболее предпочтительна, благодаря отсутствию ионов Сu в смеси и возможности более быстрого протекания процесса. Были получены конгломераты ~160 нм, состоящие из магнитных наночастиц g-Fe2O3 со средним размером ~7 нм, имеющие в своём составе легко доступные функциональные группы. Для получения устойчивых биосовместимых магнитных суспензий частиц была проведена их модификация амфифильными молекулами (PMAO-PEG) имеющими в своём составе «легкодоступные» функциональные группы, которые в дальнейшем позволили провести конъюгацию с антителами, сохраняя их специфичность. Конъюгаты магнитных наночастиц магнетита с антигеном аблюминальной мембраны эндотелиоцитов AMVB1, показывают высокую специфичность к опухолям селезенки или головного мозга. Предложен оригинальный подход для получения наночастиц серебра, поверхность которых стабилизирована сложной полиэлектролитной композицией PMAO-PEG с антителами MAb2B6.