|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Исследование аберрантной экспрессии ключевых фоторецепторных белков в опухолевых клеткахНИР
- Руководитель НИР: Филиппов П.П.
- Участники НИР: Бажин А.В., Ворожейкина И.П., Ганчарова О.С., Головастова М.О., Замятнин А.А., Савченко М.С., Скорикова Е.Е.
- Подразделение: Отдел сигнальных систем клетки
- Срок исполнения: 1 января 2012 г. - 31 декабря 2014 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 12-04-00922
- Номер ЦИТИС: 01201258969
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Структура и функционирование клетки. Межклеточные взаимодействия. Молекулярные механизмы клеточной дифференцировки, иммунитета и онкогенеза. Взаимодействие вирус-клетка.
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 31.27.31 Биохимия опухолей
- 76.03.35 Медицинская гистология
-
Ключевые слова:
опухолевые клетки, аутоантитела, аденокарцинома поджелудочной железы, ретинобластома, раково-сетчаточные антигены, фоторецепторные белки, паранеопластические антигены
-
Описание:
В проекте планируется решить следующие задачи. Задача 1. Ранее нами была детально исследована аберрантная экспрессия рековерина в опухолях легких [Bazhin A.V. et al. Lung Cancer. 2001;34:99-104; Savchenko M.S. et al. Lung Cancer. 2003;41:363-7; Bazhin A.V. et al. Lung Cancer. 2004;44:193-8]. Позднее была впервые обнаружена аберрантная экспрессия фоторецепторных белков в тканях кожной меланомы [Bazhin A.V. et al. Cancer Immunol. Immunother. 2007;56:110-6; Bazhin A.V. et al. Int. J. Cancer. 2007;120:1268-76; Bazhin A.V. et al. Int. J. Cancer. 2009;124:140-9] и тканях аденокарциномы поджелудочной железы [Karakhanova S. et. al. Pancreas. 2014; 43:784-94]. Недавно нами было начато исследование аберрантной экспрессии рековерина в клетках ретинобластомы. В настоящее время завершается изучение экспрессии рековерина в опухолях почки. В предлагаемом проекте планируется провести исследование ранее неизученной аберрантной экспрессии рековерина в опухолях надпочечников. Актуальность выбранного объекта обусловлена трудностью гистохимического различения доброкачественных и злокачественных опухолей надпочечников. Задача 2. В норме рековерин локализован преимущественно в клетках сетчатки, где он взаимодействует с фоторецепторными мембранами с помощью миристоильного остатка. Поскольку субклеточная локализация рековерина в опухолевых клетках оставалась неизвестной, недавно нами была проведено электронно-микроскопическое исследование внутриклеточной локализации рековерина в клетках ретинобластомы Y79. При этом не удалось установить, связан ли рековерин с какими-то клеточными структурами. В связи с этим возник вопрос о наличии/отсутствии миристоильного остатка в структуре рековерина в клетках ретинобластомы Y79. Для ответа на этот вопрос будет выполнен масс-спектроскопический анализ рековерин-содержащего экстракта указанных опухолевых клеток с использованием миристоилированного и немиристоилированного препаратов рековерина в качестве маркеров. Задача 3. Ранее мы продемонстрировали функциональную значимость для опухолевых клеток таких фоторецепторных белков, как трансдуцин и cGMP-фосфодиэстераза 6 [Bazhin A.V. et al. Cell. Mol. Life Sci. 2010;67:817-28]. Однако вопрос о функциональной значимости рековерина для трансформированных клеток все еще остается открытым. В этой связи нами планируется с использованием метода РНК-интерференции получить стабильную клеточную линию ретинобластомы Y79 с пониженной экспрессией (нокдауном) гена рековерина.
-
Основные результаты:
1. Опубликовано большое число работ по внутриклеточной локализации рековерина в нормальных клетках сетчатки, однако данные по внутриклеточной локализации этого белка в трансформированных клетках сетчатки в литературе отсутствовали. В 2014 году нами завершено электронно-микроскопическое исследование внутриклеточной локализации рековерина в клетках ретинобластомы Y79. Установлено, что рековерин преимущественно локализован в цитоплазме этих клеток, где он связан с неустановленными на данный момент структурами, отличными от плазматической и ядерной мембран; минорная фракция рековерина выявлена также в ядре некоторых клеток ретинобластомы. 2. Получены высокоочищенные препараты раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина в количестве достаточном для проведения скриннинга сыворотки крови пациентов со злокачественными опухолями почки и простаты на присутствие аутоантител против указанных антигенов. 3. С использованием полученных раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина проведено определение встречаемости аутоантител против этих белков в образцах сыворотки крови пациентов с диагнозом рак почки и рак предстательной железы. В результате анализа частота встречаемости аутоантител против аррестина при раке почки составила 54%, при раке предстательной железы – 52%, для рековерина частоты были 3% и 4%, соответственно; антитела против родопсина отсутствовали во всех образцах. 4. С использованием антител против раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина был проведен анализ частот их встречаемости в 49 гистологических образцах рака почки. Для аррестина и родопсина при раке почки, а также для всех трех антигенов при раке простаты не удалось избавиться от неспецифического окрашивания срезов, поэтому детальное исследование было выполнено для экспрессии рековерина в гистологических образцах рака почки. Найдено, что частота экспрессии этого антигена в образцах рака почки варьирует в пределах 50%-92% в случае хромофобного рака и онкоцитомы, соответственно.
- Добавил в систему: Скорикова Елена Евгеньевна
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 1 января 2012 г.-31 декабря 2012 г. | Исследование аберрантной экспрессии ключевых фоторецепторных белков в опухолевых клетках |
| Результаты этапа: Ключевые фоторецепторные белки такие, как рековерин, родопсин, трансдуцин, cGMP-фосфодиэстераза 6 (PDE6), cGMP-зависимые катионные каналы, гуанилилциклаза 1 (GC1) и аррестин, в норме высокоспецифичные для сетчатки глаза, могут аберрантно экспрессироваться в злокачественных опухолях, локализованных вне сетчатки, тем самым являясь раково-сетчаточными антигенами (cancer-retina antigens, CRA). Некоторые из CRA способны вызывать иммунный ответ и развитие паранеопластической дегенерации сетчатки у онкологических пациентов, т.е. представляют собой также паранеопластические антигены. Ранее нами была детально исследована аберрантная экспрессия рековерина в опухолях легких и впервые обнаружена аберрантная экспрессия CRA в тканях кожной меланомы. В настоящем проекте исследуется аберрантная экспрессия CRA в аденокарциноме поджелудочной железы (АПЖ), которая представляет собой одну из наиболее агрессивных опухолей, характеризующуюся крайне неблагоприятным прогнозом со средней медианой выживания порядка 4 – 6 месяцев. На данном этапе проекта нами получены следующие основные результаты. Показано, что CRA аберрантно экспрессируются в клеточных линиях и опухолях аденокарциномы поджелудочной железы на уровне мРНК и белка. Определен паттерн и частоты аберрантной экспрессии CRA в указанных объектах, при этом найдено, что GC1, PDE6 и трансдуцин экспрессируются с высокой частотой. Найдено, что аберрантная экспрессия CRA в ткани АПЖ вызывает появление аутоантител против них в сыворотке крови некоторых пациентов с этой опухолью. Найдено, что GC1 вовлечена в метаболизм cGMP и гомеостаз ионов кальция в клетках АПЖ, что указывает на функциональную роль в них этого фермента. Ингибирование экспрессии GC1 приводит к снижению выживаемости, пролиферации и способности к миграции без изменения спонтанного апоптоза исследуемых злокачественных клеток, которые погибают путем некроза. Более того, подавление аберрантной экспрессии GC1 в опухолях АПЖ приводит к снижению объема этих опухолей, уменьшению перитонеального карциноза, падению частоты появления метастазов и увеличению выживаемости мышей с привитыми опухолями. Сделан вывод, что уровень аберрантной экспрессии GC1 оказывает влияние на жизнеспособность АПЖ, что говорит о функциональности аберрантной экспрессии этого фермента в клетках исследуемой опухоли. Начато исследование действия антител против рековерина на рековерин-положительные клетки ретинобластомы Y79 и впервые показано, что эти антитела способны проникать в цитоплазму исследуемых клеток. | ||
| 2 | 1 января 2013 г.-31 декабря 2013 г. | Исследование аберрантной экспрессии ключевых фоторецепторных белков в опухолевых клетках |
| Результаты этапа: Впервые установлено, что антитела против рековерина оказывают значительное цитотоксическое действие на клетки ретинобластомы Y79, аберрантно экспрессирующие этот антиген, и мало влияют на пролиферацию этих клеток. Впервые показано, что протеинкиназа G1 (PKGI), экспрессируемая в клетках панкреатической аденокарциномы (ПАК) человека, важна для функционирования этих клеток. DT3 – специфический ингибитор PKGI – оказывает цитотоксическое действие на клетки ПАК путем некроза и снижает их пролиферацию и миграцию. В качестве потенциальных мишеней для PKGI рассматриваются протеинкиназы ERK1/2 и p38. Кроме того найдено, что уровень cGMP, влияющий на пролиферацию клеток ПАК, регулируется в них cGMP-фосфодиэстеразой и NO-гуанилилциклазой. Предполагается, что сигнальный путь с участием cGMP и PKGI может быть мишенью для разработки нового подхода для терапии аденокарциномы человека. В рамках совместной работы с Медицинским университетом им. И.М. Сеченова собраны обширные коллекции срезов злокачественных опухолей почки и простаты и образцов сыворотки, взятых от пациентов с этими опухолями. Начаты серийные анализы срезов этих опухолей на экспрессию в них нескольких раково-сетчаточных антигенов (cancer-retina antigens, CRA) и образцов сыворотки крови от пациентов со злокачественными опухолями почки и простаты на присутствие в них аутоантител против соответствующих CRA. | ||
| 3 | 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Исследование аберрантной экспрессии ключевых фоторецепторных белков в опухолевых клетках |
| Результаты этапа: В 2014 году нами завершено электронно-микроскопическое исследование внутриклеточной локализации рековерина в клетках ретинобластомы Y79. Установлено, что рековерин преимущественно локализован в цитоплазме этих клеток, где он связан с неустановленными на данный момент структурами, отличными от плазматической и ядерной мембран; минорная фракция рековерина выявлена также в ядре некоторых клеток ретинобластомы.Получены высокоочищенные препараты раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина в количестве достаточном для проведения скриннинга сыворотки крови пациентов со злокачественными опухолями почки и простаты на присутствие аутоантител против указанных антигенов. С использованием полученных раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина проведено определение встречаемости аутоантител против этих белков в образцах сыворотки крови пациентов с диагнозом рак почки и рак предстательной железы. В результате анализа частота встречаемости аутоантител против аррестина при раке почки составила 54%, при раке предстательной железы – 52%, для рековерина частоты были 3% и 4%, соответственно; антитела против родопсина отсутствовали во всех образцах. С использованием антител против раково-сетчаточных антигенов рековерина, аррестина и родопсина был проведен анализ частот их встречаемости в 49 гистологических образцах рака почки. Для аррестина и родопсина при раке почки, а также для всех трех антигенов при раке простаты не удалось избавиться от неспецифического окрашивания срезов, поэтому детальное исследование было выполнено для экспрессии рековерина в гистологических образцах рака почки. Найдено, что частота экспрессии этого антигена в образцах рака почки варьирует в пределах 50%-92% в случае хромофобного рака и онкоцитомы,соответственно. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".