ИСТИНА

Целые мумии животных ледникового периода – большая редкость, поэтому находка замороженной мумии первобытного бизона представляет уникальный шанс исследовать не только само животное, но и прижизненно ассоциированный с ним микробный комплекс. Целью проекта является изоляция и изучение реликтовых дрожжевых грибов с поверхности и из внутренней части мумии Анюйского бизона, а также из окружающих вечномерзлых пород. Замороженная мумия первобытного бизона (Bison priscus), возраст которой по первичной датировке составляет около 45000 лет, была обнаружена на р. Малый Анюй (Чукотка), от названия реки мумия и получила своё имя. Замечательная сохранность и условия находки мумии в замороженном состоянии, благодаря её быстрому обнаружению и дальнейшему сохранению замороженного состояния, дают уникальный шанс изучения микроорганизмов, ассоциированных с животным. К настоящему времени существует большое количество работ по исследованию прокариотного сообщества ассоциированного с находками мумий древних животных, однако эукариотным микроорганизмам внимание практически не уделялось, хотя имеются данные об их сохранении в мумиях (Neustroev, 2012). Тогда как, именно одноклеточные (дрожжевые) формы грибов наиболее часто встречаются в анаэробных местообитаниях, типа кишечного тракта животных. Изучение такой группы микроорганизмов как реликтовые дрожжевые грибы представляет интерес, связанный как с более полной реконструкцией условий жизни несколько десятков тысяч лет тому назад, так и с проблемой, в которой дрожжевым грибам может принадлежать лидирующая роль как типичному объекту молекулярно-биологических исследований в работах по криоанабиозису и эволюции. В рамках данного проекта впервые будет осуществлено выделения жизнеспособных форм дрожжевых грибов, относящихся к одному из представителей мамонтового фаунистического комплекса. Также в рамках данного проекта впервые будет произведено масштабное исследование реликтового сообщества дрожжевых грибов, сохранившихся в вечномерзлых породах. Полученные данные по составу дрожжевого сообщества позволят получить ответы на некоторые вопросы палеобиологии, связанные со сравнением палеосообщества микроорганизмов с современными аналогами, ассоциированными с хорошо изученными современными животными и с почвенно-растительными субстратами. Дальнейшие запланированные работы по изучению и сравнению выделенных штаммов с современными видами с использованием культуральных, физиологических и молекулярно-генетических методов представляют интерес для систематики и эволюционной биологии, позволяя получить ответы на вопросы, касающиеся концепции вида и видообразования.

Впервые проведено исследование дрожжевых грибов поверхности, внутренних тканей и кишечника мумии бизона, возраст которой составляет около 45000 лет. Показано, что дрожжи можно выделить с замороженных в течение нескольких тысяч лет субстратов плейстоценового возраста животного происхождения методом накопительных культур. Обнаружено, что дрожжевые комплексы шерсти и кожи мумии бизона принципиально отличаются и, кроме того, сохраняют некоторые черты микробных сообществ, свойственных современным животным и тем условиям, в которых они обитают. Сравнение полученных в ходе проведения работы результатов с имеющимся в литературе небольшим количеством данных по выделению дрожжевых грибов из вечномерзлых пород возрастом несколько тысяч лет показывает, что некоторые выделенные нами виды неоднократно были встречены ранее в древних породах. Aureobasidium pullulans, Cryptococcus albidosimilis, Cryptococcus magnus, Debaryomyces hansenii упоминались ранее среди дрожжей вечной мерзлоты Антарктики, Арктики и Сибири. Проведенное исследование одного из выделенных с поверхности туши штамма вида Candida saitoana показало, что обнаруженный штамм является неизвестной ранее разновидностью, существенно дивергировавшей по нуклеотидным последовательностям рДНК, а также имеющей некоторые фенотипические особенности, не характерные для других штаммов этого вида. Изучение дрожжевого сообщества кишечника было проведено не только методами посева через накопительную культуру, но и прямым микроскопическим методом. Использование флуоресцентных красителей позволило обнаружить среди содержимого кишечника, наполненного растительной биомассой, клетки, сходные размером с дрожжевыми или с конидиями мицелиальных грибов. Исследование образцов содержимого кишечника позволило выделить новый для науки темнопигментированный вид дрожжевого гриба из пор. Myriangiales рода Endosporium, отличающийся по филогенетическим и некоторым фенотипическим характеристикам от других видов рода и от близких родов. Анализ образцов, отобранных при вскрытии мумии, показал изоляцию сохранившегося внутри животного микробного комплекса. Были обнаружены принципиальные отличия в дрожжевом сообществе поверхности мумии и её кишечника, так выделение только одного вида при вскрытии мумии показывает, что в кишечнике, очевидно, создаются не самые благоприятные условия для сохранения дрожжей, в отличие от микромицетов.