Роль Wnt сигнального пути в эмбриональных и постэмбриональных морфогенезах губки Halisarca dujardini (Porifera: Demospongiae) НИР

Источник финансирования НИР

грант РФФИ

Этапы НИР

# Сроки Название
2 1 января 2013 г.-31 декабря 2015 г. Роль Wnt сигнального пути в эмбриональных и постэмбриональных морфогенезах губки Halisarca dujardini (Porifera: Demospongiae)
Результаты этапа: В соответствии с планами на 2014 г., поставленные задачи как научного, так и организационного характера в основном выполнены. Проведены сбор и подготовка экспериментального материала (губки Halisarca dujardini) в период летнего сезона на беломорской станции ЗИН РАН «Картеш» и на морской станции Гетеборгского университета Sven Loven Marine station (Швеция). Там же осуществлены микрохирургические операции, микроинъекции, эксперименты с ингибиторами, фиксация животных и выделение нуклеиновых кислот. Нами получены принципиально новые, не опубликованные ранее данные. Были клонированы фрагменты генов Wnt-лигандов длиной 900-1100 п.н. в транскрипционный вектор с которого синтезированы меченные РНК-зонды к каждому из 10 идентифицированных HdWnt, а также к рецептору Frizzledи вторичному цитоплазматическому мессенджеру Dishevelled. Адаптирована методика проведения гибридизации нуклеиновых кислот insituна губках с целью локализации транскриптов с применением РНК-зондов, меченных дигоксигенином. Изучена экспрессияwnt у интактной H. dujardini. По локализации транскриптов выделено три области экспрессии генов HdWnt: 1- оскулярный домен, охватывающий оскулярную трубку и демонстрирующий экспрессиюHdWntD, 2 - периферический домен, локализованный вдоль границы экзо- и базопинакодермы и экспрессирующий HdWntF, HdWntH и HdWntI, 3 - повсеместную мозаичную экспрессию генов HdWntE, HdWntK и HdWntG в клетках экзопинакодермы и мезохила. Экспрессия wnt в ходе регенерации оценивалась методом гибридизации insitu и сравнивалась с паттернами экспрессии HdWntу интактных губок. Экспрессия HdWntменяется при регенерации части тела H. dujardini. Для большинства генов HdWntэкспрессия изменяется в течение первых 6 часов и сохраняется в таком виде вплоть до 24 часов регенерации. Паттерны экспрессии генов HdWntD, HdWntE и HdWntGне меняются при регенерации по сравнению с интактной губкой. Ни один из этихwnt не экспрессируется в клетках на раневой поверхности. Ген HdWntJ сильно экспрессирован в единичных клетках исключительно на раневой поверхности на протяжении первых 24 часов регенерации. Экспрессия HdWntK наблюдается уже через 6 часов после операции и ограничена краем раны. Через 24 часа транскрипт появляется в периферическом домене – в экзопинакодерме, граничащей с базопинакодермой. Экспрессия HdWntFв течение первых 12 часов регенерации наблюдается мозаично по всей поверхности неповрежденной экзопинакодермы, а через 24 часа после операции, паттерн экспрессии стягивается до периферического домена. Паттерны экспрессии HdWntHи HdWntIв течение первых 24 часов регенерации с помощью гибридизации insituне выявляются. Транскрипты генов HdWntD, HdWntE, HdWntF, HdWntG, HdWntHи HdWntI на уровне, достаточном для детекции, в клетках личинок H. dujardini не выявлены. Большое количество мРНК гена HdWntC равномерно распределено в покровном жгутиковом личиночном эпителии. Гены HdWntJ и HdWntK экспрессируются в виде широкого кольца по экватору личинки, не заходя на задний полюс. Лиганд HdWntL экспрессируется в отдельных группах клеток поверхностного эпителия на заднем полюсе.

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".