ИСТИНА

В соответствии с планом на 2016 г. были проведены полевые сборы личинок Pyramicocephalus phocarum (Diphyllobothriidea) на Белом море, личинок и половозрелых червей из отр. Trypanorhyncha на Черном море, получены новые данные по биологии, ультраструктурному строению и нейрохимической организации четырех видов плероцеркоидов. Для изучения жизненного цикла P. phocarum методом ПЦР были исследованы некоторые виды беломорских ракообразных - кандидатов на роль первого промежуточного хозяина процеркоида. Экспериментальное заражение млекопитающих плероцеркоидами P. phocarum мы проводили с использованием лабораторных крыс в 2016 г. и сирийских хомяков в 2015 г.; раннее (Rausch, Adams, 2000) заражали собак, кошек и 2 мужчин-добровольцев; эксперименты дали отрицательный результат: яйца или стробилы получены не были. Вероятно, Pyramicocephalus phocarum имеет более высокую степень специфичности к окончательному хозяину, чем представители рода Diphyllobothrium. Расшифровка жизненного цикла P. phocarum требует дальнейших исследований. Для расшифровки жизненных циклов цестод отряда Trypanorhyncha исследовали материал полевых сборов в районах крымского побережья Черного моря. Впервые обнаружены плероцеркоиды Dollfusiella aculeata Beveridge, Neifar et Euzet, 2004 у морского ерша Scorpaena porcus и камбалы глосса Platichthys flesus; плероцеркоиды Parachristianella trygonis Dollus, 1946 – у средиземно-морского налима Gaidropsarus mediterraneus и бычка-зеленчака Zosterisessor ophicephalus. Так же у налима впервые в Черном море найдены плероцеркоиды еще одного вида – Prochristianella papilifer (Полякова, Бисерова, 2016). Были установлены оптимальные температуры для развития яиц и сроки эмбриогенеза у трех видов трипаноринх: Grillotia erinaceus, Progrillotia palmi, P. pastinacae. Экспериментально доказано, что жизненный цикл G. erinaceus осуществляется с выходом свободноплавающей личинки – корацидия. Напротив, у представителей рода Progrillotia жизненный цикл протекает без выхода корацидия, а постэмбриональное развитие происходит только в организме первого промежуточного хозяина. Для выявления структурных адаптаций к обитанию в рыбах – вторых промежуточных хозяев, в 2016 году изучали особенности микроскопической анатомии и ультраструктуры плероцеркоидов P. phocarum ( Diphyllobothriidea) и Nybelinia surmenicola (Trypanorhyncha: Tentaculariidae). У P. phocarum выявлено 3 типа микротрихий различной структурной и функциональной специализации; 2 типа желез, экзо- и эндокринной природы (Мустафина, Хуторянская, 2016; Мустафина, Бисерова, 2016). Интенсивное развитие фронтальных желез на сколексе отмечено нами и для других плероцеркоидов дифиллоботриид D. ditremum, D. dendriticum; для всех характерно наличие в тегументе стационарных пор желез, и расположенных вокруг них сенсорных органов в виде ресничных и безресничных нервных окончаний. Для P. phocarum характерно мощное развитие опорного матрикса и наличие в нем длинных радиальных фибрилл, выполняющих функцию эластичного скелета. Отмечено большое количество и упорядоченное расположение кальцинированных телец, установлена их связь с мускулатурой, что предполагает новый взгляд на функциональную роль этих структур в качестве опорных элементов, позволяющих плероцеркоиду выдерживать давление тканей хозяина и способствовать активному перемещению в теле хозяина. Впервые доказано активное поступательное движение плероцеркоидов N. surmenicola, изучен репертуар движений, включающий несколько фаз двигательной активности (Гордеев, Бисерова, 2016а). Сенсорный аппарат N. surmenicola беден и представлен расположенным на ботриях механорецептором (Biserova et al., 2016), в отличие от других видов трипаноринх, ботрии которых выполняют сенсорную функцию и снабжены многочисленными сенсорными органами (Корнева, Бисерова, 2016; Гордеев Бисерова, 2016 б). На примере Progrillotia sp. изучено строение и иннервация хоботкового аппарата трипаноринх. С помощью CLSM впервые доказано, что ретракторы хоботков иннервируются серотонинергическими нейронами, расположенными в основании каждого ретрактора (Бисерова и др.,2016). Изучено распределение иммуномодуляторных, нейромодуляторных и нейроактивных молекул в организме модельного вида цестод плероцеркоида D. dendriticum, выявлены места синтеза PG E2, PG D2 в разных тканях паразита (Kytyrev et all, in press). Всего по результатам 2016 года было опубликовано 9 работ, три статьи находятся в печати (положительные рецензии получены). Результаты исследований представлены для обсуждения на 4 конференциях.

В процессе выполнения работ в 2017 г. будет продолжен сбор гельминтов от рыб Черного моря, с целью изучения морфологии, биологии и жизненных циклов отдельных видов цестод отрядов Trypanorhyncha и Diphyllidea. Будут продолжены эксперименты по искусственному заражению и выращиванию личиночных стадий отдельных видов цестод отряда Trypanorhyncha. Будут продолжены работы по изучению ультраструктуры тканевых систем личинок и взрослых цестод для сравнительного анализа и описания структурных основ паразито-хозяинных отношений. Отв. Полякова Т.А., Бисерова Н.М. Будет исследована ультраструктура сенсорных органов и нервной системы плероцеркоида P. phocarum, изучена микроскопическая анатомия выделительной системы. На основе имеющихся и вновь полученных данных предполагается сделать трехмерную реконструкцию протонефридия P. phocarum, провести сравнительный анализ строения выделительной системы морских и пресноводных дифиллоботриид. Отв. Мустафина А.Р. Бисерова Н.М. Будут описаны строение нервной, выделительной, мышечной систем N. surmenicola. Данные по исследованию микроскопической анатомии N. surmenicola будут обобщены и опубликованы. Отв. Гордеев И.И. Бисерова Н.М. Будут проведены ультраструктурные исследования тегумента и желез двух видов дифиллоботриид при воздействии сывороткой крови хозяев-рыб, изучена структурная (пластичная) реакция тегумента на воздействие иммунных факторов; определена степень пластичности тегумента цестод в условиях длительного воздействия антигенами хозяина. Отв. Кутырев И.А., Бисерова Н.М. Результаты, полученные в процессе выполнения проекта, будут опубликованы в открытой печати, включая высокорейтинговые журналы (Parasitology Research, Molecular & Biochemical Parasitology; Zoology) доложены на международных научных мероприятиях 9th International Workshop on Cestodes Systematics and Phylogeny, 2017 Germany 4th International Congress on Invertebrate Morphology (ICIM4)

За предыдущий период исследованы структурные основы паразито-хозяинных отношений у 5 видов цестод из разных отрядов, паразитирующих в акулах, скатах и костистых рыбах, как половозрелых, так и личинок.

В соответствии с планом на 2016 г. были проведены полевые сборы личинок Pyramicocephalus phocarum (Diphyllobothriidea) на Белом море, личинок и половозрелых червей из отр. Trypanorhyncha на Черном море, получены новые данные по биологии, ультраструктурному строению и нейрохимической организации четырех видов плероцеркоидов. Для изучения жизненного цикла P. phocarum методом ПЦР были исследованы некоторые виды беломорских ракообразных - кандидатов на роль первого промежуточного хозяина процеркоида. Экспериментальное заражение млекопитающих плероцеркоидами P. phocarum мы проводили с использованием лабораторных крыс в 2016 г. и сирийских хомяков в 2015 г.; раннее (Rausch, Adams, 2000) заражали собак, кошек и 2 мужчин-добровольцев; эксперименты дали отрицательный результат: яйца или стробилы получены не были. Мы предполагаем, что Pyramicocephalus phocarum может иметь более высокую степень специфичности к окончательному хозяину, чем представители рода Diphyllobothrium. Расшифровка жизненного цикла P. phocarum требует дальнейших исследований. Для расшифровки жизненных циклов цестод отряда Trypanorhyncha исследовали материал полевых сборов в районах крымского побережья Черного моря. Впервые обнаружены плероцеркоиды Dollfusiella aculeata Beveridge, Neifar et Euzet, 2004 у морского ерша Scorpaena porcus и камбалы глосса Platichthys flesus; плероцеркоиды Parachristianella trygonis Dollus, 1946 – у средиземноморского налима Gaidropsarus mediterraneus и бычка-зеленчака Zosterisessor ophicephalus. Так же у налима впервые в Черном море найдены плероцеркоиды еще одного вида – Prochristianella papilifer (Полякова, Бисерова, 2016). Были установлены оптимальные температуры для развития яиц и сроки эмбриогенеза у трех видов трипаноринх: Grillotia erinaceus, Progrillotia palmi, P. pastinacae. Экспериментально доказано, что жизненный цикл G. erinaceus осуществляется с выходом свободноплавающей личинки – корацидия. Напротив, у представителей рода Progrillotia жизненный цикл протекает без выхода корацидия, а постэмбриональное развитие происходит только в организме первого промежуточного хозяина. Для выявления структурных адаптаций к обитанию в рыбах – вторых промежуточных хозяевах в 2016 году изучали особенности микроскопической анатомии и ультраструктуры плероцеркоидов P. phocarum ( Diphyllobothriidea) и Nybelinia surmenicola (Trypanorhyncha: Tentaculariidae). У P. phocarum выявлено 3 типа микротрихий различной структурной и функциональной специализации; 2 типа желез, экзо- и эндокринной природы (Мустафина, Хуторянская, 2016; Мустафина, Бисерова, 2016). Интенсивное развитие фронтальных желез на сколексе отмечено нами и для других плероцеркоидов дифиллоботриид D. ditremum, D. dendriticum; для всех характерно наличие в тегументе стационарных пор желез, и расположенных вокруг них сенсорных органов в виде ресничных и безресничных нервных окончаний. Особенностью плероцеркоида P. phocarum является мощное развитие опорного матрикса и наличие в нем длинных радиальных фибрилл, выполняющих функцию эластичного скелета. Отмечено большое количество и упорядоченное расположение кальцинированных телец, установлена их связь с мускулатурой, что предполагает новый взгляд на функциональную роль этих структур в качестве опорных элементов, позволяющих плероцеркоиду выдерживать давление тканей хозяина и способствовать активному перемещению в теле хозяина. Впервые доказано активное поступательное движение плероцеркоидов N. surmenicola, изучен репертуар движений, включающий несколько фаз двигательной активности (Гордеев, Бисерова, 2016а). Сенсорный аппарат N. surmenicola беден и представлен расположенным на ботриях механорецептором (Biserova et al., 2016), в отличие от других видов трипаноринх, ботрии которых выполняют сенсорную функцию и снабжены многочисленными сенсорными органами (Корнева, Бисерова, 2016; Гордеев Бисерова, 2016 б). На примере Progrillotia sp. изучено строение и иннервация хоботкового аппарата трипаноринх. С помощью конфокального лазерного микроскопа впервые доказано, что ретракторы хоботков иннервируются серотонинергическими нейронами, расположенными в основании каждого ретрактора (Бисерова и др.,2016) Изучено распределение иммуномодуляторных, нейромодуляторных и нейроактивных молекул в организме модельного вида цестод плероцеркоида D. dendriticum, выявлены места синтеза PG E2, PG D2 в разных тканях паразита активных молекул в тканях цестод. Всего по результатам 2016 года было опубликовано 9 работ, три статьи находятся в печати (положительная рецензия получены). Результаты исследований представлены для обсуждения на 4 конференциях.