| 1 |
17 сентября 2010 г.-15 ноября 2010 г. |
этап 1 |
| Результаты этапа: 1. Подготовлен аналитический обзор по исследуемой проблеме.
2. Осуществлен выбор обоснованного варианта направления исследований.
3. Составлен план проведения экспериментальных и теоретических исследований.
4. Разработана система экспрессии генов мембранных белков, спланированы генетические конструкции.
5. Проведена сборка экспрессионных конструкций. |
| 2 |
1 января 2011 г.-2 декабря 2011 г. |
этап 2 |
| Результаты этапа: 1. Созданы бактериальные штаммы-продуценты для эффективной экспрессии генов рекомбинантных мембранных белков. Подбраны условия культивирования всех исследуемых рекомбинантных штаммов.
2. Проанализированы уровни экспрессии, изучена локализация продуктов экспрессии, выбраны оптимальные системы экспрессии для всех объектов исследования. Проведено сравнение уровней экспрессии генов на богатой и бедной (для синтеза изотопно-меченых белков) средах.
3. Наработаны необходимые количества мембранных белков (объектов исследования).
4. Подобраны условия солюбилизации мембранных белков детергентами в зависимости от локализации белка в клетке.
5. Разработаны методики очистки мембранных белков. Изучена стабильность очищенных белков в мицеллярном окружении. |
| 3 |
1 января 2012 г.-15 ноября 2012 г. |
этап 3 |
| Результаты этапа: 1. Проведена солюбилизация и рефолдинг очищенных препаратов мембранных белков в присутствии различных детергентов, липидов и их смесей (SDS, DPC, LDAO, DDM, LMPC, LMPG, DHPC, DMPC, DMPG и др.).
2. Полученные препараты белка проанализированы различными физико-химическими методами (масс-спектрометрия, КД-спектроскопия, динамическое светорассеяние).
3. Проведена наработка необходимых количеств белкового препарата, а также их изотопно-меченных производных для проведения структурных исследований методом ЯМР.
4. Полученные препараты белка исследованы методом ЯМР. Показана возможность получения пространственной структуры выделенных объектов, что говорит о высоком качестве полученных белковых образцов.
5. Показаны рекомендации для использования результатов проведенных НИР в реальном секторе экономики, а также рекомендации по использованию результатов НИР при разработке научно-образовательных курсов. |
