| 1 |
1 января 2013 г.-31 декабря 2013 г. |
Роль системы микротрубочек в защите и восстановлении барьерной функции эндотелиальных клеток |
| Результаты этапа: Методом иммунофлуоресцентной микроскопии показано, что при воздействии аденозина окрашенные специфическими антителами межклеточные VE-кадгериновые контакты изменяют свою морфологию, они неравномерно утолщаются, приобретая выраженный поперечный размер, значительный на отдельных участках. Проанализированы изменения, которые претерпевают компоненты цитоскелета эндотелиальной клетки на разных стадиях формирования функционального эндотелиального монослоя. Виментиновые промежуточные филаменты, гомогенно распределённые по всей цитоплазме одиночной эндотелиальной клетки, исключая ее ламеллу, по мере формирования монослоя незначительно увеличивают занимаемую в цитоплазме площадь. В эндотелиоцитах актин формирует структуры двух типов - кортикальный актин и пучки стресс-фибрилл. Кортикальный актин характерен для одиночных эндотелиоцитов и эндотелиальных клеток с небольшой (до 30%) протяжённостью межклеточных контактов, он расположен в зоне свободного края клетки. Стресс-фибриллы обнаруживаются в эндотелиоцитах на всех стадиях формирования конфлуэнтного монослоя, их количество не зависит от протяженности контакта эндотелиальной клетки с соседями. Наибольшие изменения при формировании эндотелиального монослоя претерпевает система микротрубочек. В одиночной распластанной на подложке эндотелиальной клетке система микротрубочек радиальна, по мере формирования контактов с соседними эндотелиоцитами она становится ассиметричной - среднее количество микротрубочек в районе формирующегося контакта с соседней эндотелиальной клеткой всегда больше, чем в области свободной ламеллы, и эта разница зависит от протяженности контакта. Симметричное расположение концов микротрубочек достигается только в полностью сформированном монослое эндотелиальных клеток со зрелыми контактами. Ассиметрия системы микротрубочек в ходе формирования монослоя эндотелиальных клеток вызвана также изменением положения центросомы. При протяженности контактов соседних эндотелиоцитов 50%-75% центросома смещается
в сторону образования нового контакта, а выше 75% - равновероятно в сторону свободной ламеллы или контактирующих с соседними краев эндотелиоцитов. Таким образом, центросома вовлечена в процесс формирования монослоя эндотелиоцитов, ее положение определяет степень симметрии радиальных микротрубочек и может влиять на количество динамичных концов микротрубочек в зоне формирующихся межклеточных контактов. При развитии барьерной дисфункции эндотелия центросома также может смещаться из геометрического центра клетки, однако оценить закономерности ее смещения в условиях быстрого разрушения VE-кадгериновых контактов сложнее, ввиду того, что потеря контактов между соседними клетками происходит не одномоментно и неравномерно на множестве небольших участков на протяжении границы контактирующих клеток, что затрудняет корректный анализ. Методом иммунофлуоресцентного анализа изучено влияния TIP-пептида (вещества-протектора барьерной функции эндотелия, имеющего отличный от аденозина механизм действия) на организацию VE-кадгериновых контактов и цитоскелета эндотелиоцитов. Воздействие TIP-пептида приводит к значительному увеличению толщины и плотности VE-кадгериновых контактов, а также к увеличению количества динамичных, но не стабильных микротрубочек в зоне, непосредственно прилегающей к межклеточным контактам. По-видимому, протекторный эффект TIP-пептида связан с его способностью изменять динамические свойства микротрубочек. |
| 1 |
1 января 2013 г.-31 декабря 2013 г. |
Роль системы микротрубочек в защите и восстановлении барьерной функции эндотелиальных клеток |
| Результаты этапа: Методом иммунофлуоресцентной микроскопии показано, что при воздействии аденозина окрашенные специфическими антителами межклеточные VE-кадгериновые контакты изменяют свою морфологию, они неравномерно утолщаются, приобретая выраженный поперечный размер, значительный на отдельных участках. Проанализированы изменения, которые претерпевают компоненты цитоскелета эндотелиальной клетки на разных стадиях формирования функционального эндотелиального монослоя. Виментиновые промежуточные филаменты, гомогенно распределённые по всей цитоплазме одиночной эндотелиальной клетки, исключая ее ламеллу, по мере формирования монослоя незначительно увеличивают занимаемую в цитоплазме площадь. В эндотелиоцитах актин формирует структуры двух типов - кортикальный актин и пучки стресс-фибрилл. Кортикальный актин характерен для одиночных эндотелиоцитов и эндотелиальных клеток с небольшой (до 30%) протяжённостью межклеточных контактов, он расположен в зоне свободного края клетки. Стресс-фибриллы обнаруживаются в эндотелиоцитах на всех стадиях формирования конфлуэнтного монослоя, их количество не зависит от протяженности контакта эндотелиальной клетки с соседями. Наибольшие изменения при формировании эндотелиального монослоя претерпевает система микротрубочек. В одиночной распластанной на подложке эндотелиальной клетке система микротрубочек радиальна, по мере формирования контактов с соседними эндотелиоцитами она становится ассиметричной - среднее количество микротрубочек в районе формирующегося контакта с соседней эндотелиальной клеткой всегда больше, чем в области свободной ламеллы, и эта разница зависит от протяженности контакта. Симметричное расположение концов микротрубочек достигается только в полностью сформированном монослое эндотелиальных клеток со зрелыми контактами. Ассиметрия системы микротрубочек в ходе формирования монослоя эндотелиальных клеток вызвана также изменением положения центросомы. При протяженности контактов соседних эндотелиоцитов 50%-75% центросома смещается
в сторону образования нового контакта, а выше 75% - равновероятно в сторону свободной ламеллы или контактирующих с соседними краев эндотелиоцитов. Таким образом, центросома вовлечена в процесс формирования монослоя эндотелиоцитов, ее положение определяет степень симметрии радиальных микротрубочек и может влиять на количество динамичных концов микротрубочек в зоне формирующихся межклеточных контактов. При развитии барьерной дисфункции эндотелия центросома также может смещаться из геометрического центра клетки, однако оценить закономерности ее смещения в условиях быстрого разрушения VE-кадгериновых контактов сложнее, ввиду того, что потеря контактов между соседними клетками происходит не одномоментно и неравномерно на множестве небольших участков на протяжении границы контактирующих клеток, что затрудняет корректный анализ. Методом иммунофлуоресцентного анализа изучено влияния TIP-пептида (вещества-протектора барьерной функции эндотелия, имеющего отличный от аденозина механизм действия) на организацию VE-кадгериновых контактов и цитоскелета эндотелиоцитов. Воздействие TIP-пептида приводит к значительному увеличению толщины и плотности VE-кадгериновых контактов, а также к увеличению количества динамичных, но не стабильных микротрубочек в зоне, непосредственно прилегающей к межклеточным контактам. По-видимому, протекторный эффект TIP-пептида связан с его способностью изменять динамические свойства микротрубочек. |
