Сайт-направленный мутагенез остатков цистеина в люциферазе светляков Luciola mingrelicaстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 24 января 2020 г.
Аннотация:Методом сайт-направленного мутагенеза на основе плазмиды pETL7, кодирующей люциферазу светляков Luciola mingrelica со вставкой His6 на С-конце, получены мутантные формы люциферазы, несущие единичные (C62S, C62V, C86S, C146S, C164S), двойные (C62/146S, C62/164S, C86/146S и C146/164S), а также тройную замену C62/146/164S. Мутации не повлияли на спектры биолюминесценции и флуоресценции фермента. Для мутантов C86S, C86/146S, C62/164S и C62/146/164S величины KATPm и KLH2m увеличились в 1,5-1,9 раза, заметно снизились уровень экспрессии, удельная активность и термостабильность фермента. Для остальных мутантов величины Km(ATP) и Km(LH2), удельная активность и уровень экспрессии не изменились. Термостабильность мутанта C146S увеличилась в ~2 и 1,3 раза при 37 и 42° соответственно. Обсуждается возможный механизм влияния данных мутаций на структуру и свойства фермента.