|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Технология редактирования генома CRISPR/Cas9 для удаления гена урокиназного рецептора для снижения пролиферации нейробластомытезисы доклада
- Авторы: Шмакова А.А., Рысенкова К.Д., Семина Е.В.
- Сборник: Материалы Международного молодежного научного форума «Ломоносов-2017»
- Редакторы: Алешковский Иван Андреевич, Андриянов Андрей Владимирович, Антипов Евгений Александрович
- Тезисы
- Год издания: 2017
- Издательство: ООО "МАКС Пресс"
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 252
- Последняя страница: 253
- Аннотация: Нейробластома – одна из самых распространенных опухолей у детей, на долю которой приходится около 10% от всех онкологических заболеваний в детском возрасте (до 15 лет). Одной из особенностей опухоли является её способность к стремительной прогрессии и раннему метастазированию, и наличие метастазов является одним из неблагоприятных факторов в прогнозе нейробластомы. В ряде исследований показано, что в низкодифференцированных типах опухолей, для которых характерно неблагоприятное гистологическое строение, и к которым также относится нейробластома, наблюдается гиперэкспрессия урокиназы (uPA) и её рецептора (uPAR). При этом высокий уровень uPA и uPAR коррелирует с высоким риском инвазии и метастазирования нейробластомы и рассматривается как прогностический маркер неблагоприятного исхода. Таким образом, использование эффективных подходов для снижения активности генов uPA или uPAR рассматривается как один из перспективных подходов к т.н. ген-специфичному направленному лечению нейробластомы. В настоящей работе мы использовали технологию редактирования генома CRISPR/Cas9 для нокаутирования гена uPAR в линейной культуре клеток нейробластомы мыши Neuro2a. Нами были созданы невирусные плазмидные конструкции, содержащие никазу Cas9 и две гидовые последовательности, направленные к первому экзону гена uPAR. Такая система вносит двухцепочечные разрывы в ген uPAR, репарация которых приводит к необратимому нарушению функции гена. Для анализа эффективности созданной плазмиды проводили последовательные трансфекции нейробластомы с последующей оценкой уровня мембранной экспрессии uPAR. После трёх трансфекций Neuro2a более чем у половины клеток (52%) экспрессия uPAR на мембране клеток отсутствовала полностью. Последующая сортировка клеток после третьей трансфекции позволила отобрать клоны, не содержащие uPAR, для последующего исследования их пролиферации. Было обнаружено, что степень подавления экспрессии uPAR влияет на скорость пролиферации клеток, и наименьшая скорость пролиферация наблюдается в клонах Neuro2a, где uPAR отсутствовал. Таким образом, полученные нами данные позволяют использовать технологию CRISPR/Cas9 для получения клеток со сниженной экспрессией uPAR, которые могут стать моделью в дальнейшем изучении роли урокиназной системы в развитии, прогрессировании и метастазирования нейробластомы. Выключение гена uPAR в опухолевых клетках при помощи данной технологии может рассматриваться в качестве возможного терапевтического подхода для снижения пролиферации опухолевых клеток при лечении нейробластомы.
- Добавил в систему: Шмакова Анна Андреевна