3D-эксплантная культура спинального ганглия мыши как модель для исследований нейротрофинов в регенеративной медицине

Семина, Е.В.; Климович, П.С.; Рубина, К.А.; Ткачук, В.А.

Авторы: Семина Е.В., Климович П.С., Рубина К.А., Ткачук В.А.
Сборник: Гены и Клетки - Материалы IV Национального Конгресса по Регенеративной Медицине. Москва, 20–23 ноября 2019 года
Том: 14
Тезисы
Год издания: 2019
Место издания: Институт Стволовых Клеток Человека Москва, Россия
Первая страница: 209
Последняя страница: 209
Аннотация: Нейротрофины играют ключевую роль в развитии, дифференцировке, выживаемости нейронов и регенера- ции нервов. В настоящем исследовании, используя 3D модель эксплантной культуры спинальных ганглиев (СГ) мышей GFP-nestin в Матригеле, мы сравнили влияние нейротрофинов NGF, BDNF и GDNF на рост аксонов и ми- грацию GFP-nestin клеток из СГ. Мыши GFP-nestin, у кото- рых нейральные предшественники экспрессируют нестин и зеленый флуоресцентный белок GFP под одним промоте- ром, были любезно предоставлены нам Г. Ениколоповым (Grigori N. Enikolopov, Renaissance School of Medicine, Stony Brook University, NY). Разработанный нами метод явля- ется удобной моделью для оценки влияния растворимых факторов и терапевтических агентов на рост и регенера- цию нервов в R&D исследованиях. Анализируя экспланты в течение 21 дня, можно оценить скорость роста и мигра- цию клеток из эксплантов в Матригель. Спинальные ган- глии GFP-nestin мышей высаживали в каплю Матригеля, в который дополнительно добавляли нейротрофины, и культивировали 14 дней. Используя иммунофлуорес- центное окрашивание эксплантов (whole 3D mount assay) и конфокальную микроскопию (Leica SP) для трехмерной визуализации, оценивали количество аксонов и число мигрировавших GFP-nestin клеток. Аксоны красили анти- телами к NF200, ядра клеток докрашивали DAPI. Было обнаружено, что GDNF достоверно стимули- рует рост аксонов (в 2 раза, p<0,05) из СГ, но не BDNF и NGF, по сравнению с контролем. Известно, что реге- нерация аксонов стимулируется также за счёт актив- ных глиальных клеток, которые выполняют трофиче- скую функцию для регенерирующих нервов, поэтому далее мы анализировали число GFP-nestin клеток, ми- грировавших из СГ в Матригель. Обнаружено, что NGF и GDNF, но не BDNF, значительно стимулируют ми- грацию GFP-nestin клеток по сравнению с контролем (p<0,05). Результаты позволяют сделать вывод о том, что наибольшей способностью стимулировать регене- рацию аксонов обладает GDNF, так как именно он сти- мулирует не только рост аксонов, но и миграцию глиаль- ных клеток. Эффект NGF хоть и выражен в стимуляции миграции глиальных клеток, тем не менее, оказывается недостаточным на регенерации аксонов. Исследование выполнено за счет гранта РНФ (проект № 19-75-30007).
Добавил в систему: Семина Екатерина Владимировна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИПМех РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИПМех РАН

3D-эксплантная культура спинального ганглия мыши как модель для исследований нейротрофинов в регенеративной медицинетезисы доклада

Прикрепленные файлы