|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
ИЗУЧЕНИЕ КИНЕТИКИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ДИГИТОНИНА И ЕГО АНАЛОГОВ С КЛЕТКАМИ НЕК293 БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 25 ноября 2020 г.
- Авторы: Ломакина Г.Ю., Фомина А.Д., Угарова Н.Н.
- Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
- Том: 61
- Номер: 3
- Год издания: 2020
- Издательство: Издательский дом МГУ
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 232
- Последняя страница: 242
- Аннотация: Дигитонин (монодесмоидный сапонин) образует комплексы с холестерином клеточных мембран, что приводит к дезинтеграции структуры мембран, образованию пор и высвобождению внутриклеточных компонентов в реакционную среду. Для изучения кинетики начального этапа взаимодействия мембран клеток с дигитонином были использованы клетки линии НЕК293, транзиентно трансфицированные плазмидой pсDNALuc, экспрессирующей люциферазу светляков. Разработана мето-дика непрерывного слежения за данным процессом биолюминесцентным методом,которая позволяет в режиме реального времени регистрировать кинетические кри-вые накопления во внеклеточном пространстве люциферазы и АТФ в присутствии дигитонина. Показано, что эффект влияния дигитонина на клеточные мембраны определяется его концентрацией в реакционной среде. При концентрациии менее 0,02 мМ наблюдается длительный период индукции, в течение которого белок не вытекает из клеток и образуются небольшие поры, проницаемые для низкомолекулярных соединений (АТФ). При повышении концентрации дигитонина до 0,05 мМ индукционный период сокращается и быстро возрастает концентрация высвобождаемой люциферазы, что свидетельствует об образовании крупных пор. Дигитонин наиболее токсичен для клеток при концентрации 0,08 мМ и более, когда в течение нескольких десятков секунд достигается максимальная концентрация высвобождаемых белков, а на кинетических кривых исчезает период индукции. Таким образом,биолюминесцентный метод позволяет изучать in situ изменения проницаемости клеточных мембран под действием мембранно-активных эффекторов на ранних стадиях процесса лизиса клеток.Ключевые слова: биолюминесценция, люцифераза светляков, клетки НЕК293, дигито-нин, сапонины, цитотоксичность, проницаемость клеточных мембран.
- Добавил в систему: Ломакина Галина Юрьевна
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|