|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Вектор на основе генома вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей для экспрессии рекомбинантных белков в клетках млекопитающихстатья
- Авторы: Балтабекова А.Ж., Шагырова Ж.С., Ким Ю.Г., Войков М.С., Жиенбай Е., Шустов А.В.
- Журнал: EURASIAN JOURNAL OF APPLIED BIOTECHNOLOGY
- Номер: 2
- Год издания: 2016
- DOI: 10.11134/btp.2.2016.5
- Аннотация: Вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) – хорошо изученный представитель родаAlphavirus семейства Togaviridae.VEE – популярный вектор для доставки генов в культуры клетокinvitro, а также для экспрессии рекомбинантных белков в культурах клеток позвоночных. Синтез всехтипов РНК VEE происходит в цитоплазме, поэтому в ходе продукции белка с гена, клонированного вгеном VEE, исключается ряд молекулярных процессов, ограничивающих эффективность системэкспрессии с плазмид.Из клонированных амплификатов собрана комплементарная ДНК (кДНК) полноразмерногогенома VEE. Собранная кДНК клонирована в составе плазмидыE.coli и встроена запоследовательностью промотора РНК-полимеразы фага SP6. Ген маркѐрного белка GFP встроен вгеном VEE под контроль синтетической копии вирусного промотора 26Sсубгеномной РНК. РНКтранскрипт рекомбинантного вируса трансфецирован в культуру клеток BHK-21. К 36 ч. послетрансфекции почти все клетки в культуре демонстрировали яркую флуоресценцию GFP. Определялититр вируса, продуцируемого трансфецированной культурой в течение 5 дней. Титр составил 8,4*105ТЦПД50 через 24 ч после трансфекции и дорос до 2,9*108 ТЦПД50 на 3 сутки наблюдения культуры.Данная статья иллюстрирует основные этапы создания вектора на основе генома VEE иоживления рекомбинантного варианта VEE, продуцирующего модельный белок. Описанный в статьевектор может найти применение для производства биофармацевтиков в Казахстане.Ключевые слова: альфавирус, эукариотическая экспрессия, вектор, транзиентная экспрессия,оживление вируса, комплементарная ДНК (кДНК).
- Добавил в систему: Войков Михаил Сергеевич
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | Полный текст | VENEZUELAN_EQUINE_ENCEPHALOMYELITIS_VIRUS_VECTOR_FOR_THE_RE… | 1,3 МБ | 9 ноября 2020 [Mikhail_Voikov] |