New Viral Vector Exploiting RNA-Polymerase I Mediated Transcriptionстатья
Информация о цитировании статьи получена из
Web of Science,
Scopus
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 18 июля 2013 г.
Аннотация:A new viral vector system exploiting RNA"polymerase I transcription has been developed. The vector is based on the crucifer TMV (crTMV) cDNA inserted in the rRNA transcriptional cassette (promoter and terminator). To visualize reproduction, the coat protein gene was substituted with green fluorescent protein (GFP) resulting in the PrrRNA"
crTMV"GFP construct. Our results show that agroinjection of N. benthamiana leaves with this vector results in GFP production from uncapped crTMV"GFP RNA as RNA polymerase I mediates synthesis of the rRNA lacking cap.
Coexpression of the crTMV 122K capping protein gene and the silencing suppressor Tomato bushy stunt virus p19 gene stimulated virus"directed GFP production more than 100"fold. We conclude that the Pol I promoter can be used to drive transcription in a transient expression system.
Эффективные растительные транзиентные системы экспрессии используют вирусные векторы, ДНК которых переносится в клетки с помощью Agrobacterium tumefaciens. В ядре РНК-полимераза II синтезирует вирусную РНК, поступающую затем в цитоплазму и направляющую синтез целевого белка. РНК вируса табачной мозаики (ВТМ), жизненный цикл которого в природных условиях проходит в цитоплазме, не приспособлена к процессам ядерного сплайсинга. Удаление присутствующих в РНК ВТМ криптических интронов системой ядерного сплайсинга приводит к потере инфекционности вирусной РНК. В нашей работе исследована возможность создания векторной системы, эксплуатирующей транскрипцию РНК-полимеразой I и не требующей сплайсинга. Для этого кДНК ВТМ крестоцветных (крВТМ) была поставлена под контроль промотора рибосомной РНК (ПррРНК), ген белка оболочки замещен геном, кодирующим GFP и, таким образом, получен вектор ПррРНК-крВТМ-GFP. Нами показано, что при агроинъекции листьев этим вектором наблюдается продукция GFP. Это происходит, по-видимому, при участии матрицы крВТМ-GFP, не содержащей кэпа, поскольку в природе РНК-полимераза I участвует в синтезе некэпированной рРНК. Уровень синтеза GFP низок, но возрастает в 100 раз при коинъекции векторами, кодирующими метилтрансферазу крВТМ и супрессор сайленсинга вируса кустистой карликовости томатов. Таким образом, создана транзиентная система экспрессии в растении на основе вирусного вектора под контролем промотора генов рРНК.