СОЗДАНИЕ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ЗОНДОВ ДЛЯ АНАЛИЗА КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ НА БАЗЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ СЕРИИ ICO С ФИКОЭРИТРИНОМ - ФЛУОРОФОРОМ ГРУППЫ ФИКОБИЛИПРОТЕИНОВ

Гриневич, А.С.; Краева, М.Н.; Захарова, Е.Н.; Блохин, Д.Ю.; Иванов, П.К.

Авторы: Гриневич А.С., Краева М.Н., Захарова Е.Н., Блохин Д.Ю., Иванов П.К.
Журнал: Российский биотерапевтический журнал
Том: 18
Номер: 3
Год издания: 2019
Издательство: Изд. группа РОНЦ
Местоположение издательства: М.
Первая страница: 39
Последняя страница: 47
DOI: 10.17650/1726-9784-2019-18-3-39-47
Аннотация: Флуоресцентные зонды на основе моноклональных антител (МКА) широко используются в научных и клинических исследованиях в области онкологии, гематологии, иммунологии, эпидемиологии. Уникальные спектральные свойства природного белка фикоэритрина (PE) сделали его доминирующим флуорофором, широко используемым для создания флуоресцентных зондов на основе МКА. Цель работы - создание иммунофлуоресцентных зондов (ИФЗ) на основе МКА и флуоресцентного красителя фикоэритрина двумя альтернативными методами белковой химии. Материалы и методы. В работе были использованы антитела к антигенам T-лимфоцитов (клон IC0-86, клон IC0-31), флуоресцентный краситель фикоэритрин и бифункциональные агенты SPDP и SMCC. Для выделения и очистки МКА использовали методы жидкостной хроматографии: на Iэтапе - аффинное выделение иммуноглобулинов на иммобилизованном белке G или в качестве альтернативы - анионообменную колоночную хроматографию. Для очистки конъюгатов (ИФЗ) от исходных компонентов реакции использовали гель-фильтрацию на колонке PD-10. Концентрацию и плотность мечения ИФЗ определяли спектрофотометрически. Результаты. Конъюгирование МКА с PE проводили при молярном отношении компонентов 1: 2. Мы использовали 2 метода белковой химии для получения конъюгатов на основе МКА с PE. Для этого оба компонента реакции конъюгации - PE и МКА - предварительно были раздельно модифицированы. Показано, что для создания ИФЗ на базе МКА серии IC0 применимы оба приведенных метода конъюгирования МКА с РЕ, однако метод II, при котором химической модификации бифункциональным агентом SMCC подвергается только молекула PE по ее свободным аминогруппам, а молекула иммуноглобулина сохраняется в максимально нативном состоянии, исключая дозированное восстановление части дисульфидных групп, является предпочтительным. Заключение. Способы, описанные в статье, позволяют получать ИФЗ на основе МКА серии ICO и РЕ, сравнимые по своим аналитическим характеристикам с зарубежными коммерческими аналогами.
Добавил в систему: Захарова Елена Николаевна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИПМех РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИПМех РАН