|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Изучение агрегационных свойств мутантных вариантов белка ядерного экспорта (NEP) вируса гриппа Атезисы доклада
- Авторы: Головко А.О., Королева О.Н., Друца В.Л.
- Сборник: XVII зимняя молодежная научная школа "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии". Сборник тезисов
- Тезисы
- Год издания: 2017
- Аннотация: Белок ядерного экспорта NEP вируса гриппа А является перспективной мишенью при разработке терапевтических подходов к лечению гриппа, поскольку он участвует в целом ряде ключевых процессов, связанных с циклом размножения вируса. В настоящее время структура и свойства белка изучены недостаточно. По данным рентгеноструктурного анализа С-концевой домен (остатки аминокислот 64-121) содержит две антипараллельные альфа-спирали, а N-концевая область не структурирована. Ранее нами была сконструирована бактериальная экспрессионная система, позволяющая с использованием аффинной хроматографии на Ni-агарозе с высокими выходами получать гомогенные препараты белка NEP с His(6)-модулем на N- или С-конце (NEP-N и NEP-С). Было обнаружено, что белок чрезвычайно склонен к образованию агрегатов. С целью изучения структурных факторов, влияющих на этот процесс, в настоящей работе путем экспрессии в клетках E.coli с последующим выделением аффинной хроматографией был получен набор мутантных вариантов белка, содержащих делеции и точечные замены: NEP-Сd1 (∆1-15), NEP-Сd2 (∆2-39), NEP-Сd3 (∆2-61), NEP-Cd (∆4-53), NEP-Nd (∆4-53), NEP-CGly (Trp78Gly). Методом динамического светорассеяния (DLS) показано, что в растворах природного NEP и всех его изученных мутантных вариантов присутствуют агрегаты размером более 200 нм. Причем наиболее крупные частицы (500-1300 нм) наблюдали в случае NEP-CGly и NEP-Сd3. Изучено влияние внешних факторов (времени выдерживания растворов, температуры, наличия различных добавок) на агрегационные свойства белков. Полученные результаты позволяют заключить: способность NEP к агрегации определяется структурой С-концевой области белка. Pабота выполнена пpи финанcовой поддержке Pоccийcкого фонда фундаментальныx иccледований (гpанты №№ 15-32-20629 и 13-04-01504).
- Добавил в систему: Nuwanda