|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Применение ВЭЖХ-масс-спектрометрии для количественного анализа нейроактивных аминокислот в гомогенатах головного мозга крыс после дериватизации с 9-флуоренилметилхлорформиатомстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК- Авторы: Попов Н.С., Балабаньян В.Ю., Петрова М.Б., Колгина Н.Ю., Петров Г.А.
- Журнал: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
- Том: 25
- Номер: 5
- Год издания: 2022
- Издательство: Общество с ограниченной ответственностью Издательский дом Русский врач
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 35
- Последняя страница: 45
- Аннотация: Актуальность. Важной составляющей механизма действия психотропных лекарственных средств является их влияние на обмен нейроактив-ных аминокислот. Изменение содержания аминокислот в структурах головного мозга крыс может выступать в роли фармакодинамического мар-кера, а также диагностического признака при изучении патогенеза заболеваний центральной нервной сиситемы. Цель исследования – разработка ВЭЖХ-МС/МС методики количественного определения нейроактивных аминокислот в гомогенатах головного мозга крыс после дериватизации с 9-флуоренилметилхлорформиатом. Материал и методы. Исследовали гомогенат мозговой ткани крыс. Выделение аминокислот из мозга крыс осуществляли с помощью гомогени-затора Поттера–Эльвейема. Депротеинизацию и дериватизацию проводили путем добавления к образцам раствора 9-флуоренилметилхлорформиата в ацетонитриле. Детектирование производных аминокислот выполняли с помощью масс-спектрометра Sciex 3200, для хроматографического разделения использовали ВЭЖХ Agilent 1260 Infinity II. Элюирование осуществляли смесью ацетонитрила и воды в гра-диентном режиме. Результаты. Пробоподготовка представляла собой смешивание 100 мкл гомогената мозговой ткани крыс, 100 мкл боратного буфера, 20 мкл 1 мМ раствора норвалина и 250 мкл 12 мМ раствора Fmoc-Cl в ацетонитриле с последующим центрифугированием в течение 10 мин. Для разделе-ния Fmoc-производных аминокислот использовали хроматографическую колонку InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 4,6×100 мм, 2,7 мкм. Общее время хроматографического анализа – 10 мин, время удерживания Fmoc-производных глицина, ГАМК, аспарагиновой и глутаминовой кислот, аспарагина и глутамина – 6,7; 6,8; 6,4; 6,4; 6,2 и 6,1 мин соответственно. Аналитический диапазон методики для каждой аминокислоты составил от 0,05 до 50 нмоль в 1 мл гомогената. Апробация методики была произведена путем анализа содержания аминокислот в головном мозге шести интактных крыс Wistar. Заключение. Разработана хромато-масс-спектрометрическая методика количественного определения глутамина, аспарагина, глицина, ГАМК, глутаминовой и аспарагиновой кислоты в гомогенатах головного мозга крыс. Для повышения чувствительности анализа была проведена пред-колоночная дериватизация аминокислот с 9-флуоренилметилхлорформиатом.
- Добавил в систему: Попов Никита Сергеевич