|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Определение антител против шиповидного белка SARS-CoV-2 в сыворотке вакцинированных добровольцев методом проточной цитометриистатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
- Авторы: Астахова Е.А., Бязрова М.Г., Миляев С.М., Сухова М.М., Михайлов А.А., Морозов А.А., Прилипов А.Г., Филатов А.В.
- Журнал: Иммунология
- Том: 43
- Номер: 4
- Год издания: 2022
- Первая страница: 447
- Последняя страница: 457
- DOI: 10.33029/0206-4952-2022-43-4-447-457
- Аннотация: Введение. Определение антител против шиповидного (Spike, S) белка нового корона-вируса SARS-CoV-2 широко используется для подтверждения текущей или перенесенной инфекции SARS-CoV-2, а также в качестве показателя эффективности вакцинации против COVID-19. Наиболее распространенным методом определения анти-S-антител является иммуноферментный анализ (ELISA), в котором используется рекомбинантный S-белок. Метод иммунофлуоресценции с последующей проточной цитометрией предоставляет альтернативную возможность для определения анти-S-антител, где в качестве S-антигена используется белок в нативной трансмембранной конформации. Цель исследования - отработка метода определения анти-S-антител с помощью проточной цитометрии, а также подбор наиболее адекватного метода обработки экспериментальных данных. Материал и методы. В исследовании приняли участие 22 добровольца (7 мужчин и 15 женщин от 25 до 70 лет, медиана - 48 лет). Все добровольцы с января по февраль 2021 г. были вакцинированы двумя дозами вакцины «Спутник V». Образцы сывороток доноров были собраны до вакцинации «Спутником V» и через 3 мес после вакцинации. 5 добровольцев к моменту вакцинации уже переболели COVID-19 в легкой форме. Остальные 17 добровольцев до вакцинации не встречались с антигеном SARS-CoV-2. Антитела против S-белка определяли методом иммунофлуоресценции с регистрацией на проточном цитометре. В качестве мишеней использовали клетки HEK293, временно трансфецированные плазмидой, кодирующей S-белок дикого типа. Трансфекцию проводили кальций-фосфатным методом. Клетки обрабатывали последовательно разведенными сыворотками, а затем окрашивали вторичными антителами анти-IgG-FE и анти-IgM-FITC. Уровень флуоресценции измеряли с помощью проточного цитометра. В качестве результата измерения использовали среднее значение флуоресценции (mean fluorescence intensity, MFI), полученное при разведении сыворотки в 18 раз, или площадь под кривой титрования (area under curve, AUC). Анти-RBD-антитела определяли с помощью иммуноферментного анализа, а вирус-нейтрализующую активность - с помощью псевдотипированного или суррогатного вирус-нейтрализационного анализа (pVNA и sVNA). Результаты. С помощью отработанного метода было показано образование анти-S-антител изотипов IgG и IgM через 3 мес после иммунизации вакциной «Спутник V». В упрощенном варианте метода относительную концентрацию антител определяли при единственном разведении тестируемой сыворотки путем измерения средней интенсивности флуоресценции (MFI) клеток-мишеней. Более надежные результаты были получены при регистрации кривой титрования и подсчета площади под кривой (AUC). Полученные таким образом результаты хорошо коррелировали с определением анти-RBD-антител методом ELISA, а также с данными вирус-нейтрализации в псевдотипиро-ванном и суррогатном вариантах. Заключение. Проточная цитометрия - это удобный метод для одновременного определения в сыворотке человека анти-S-антител изотипов IgG и IgM. К преимуществам метода относится то, что S-белок представляется в нативной трансмембранной конформации. После незначительной модификации отработанный метод можно использовать для определения уровня анти-S-антител против мутантных вариантов SARS-CoV-2.
- Добавил в систему: Михайлов Артем Андреевич