|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Применение флуоресцентных белковых зондов для измерения скорости реакций, протекающих с участием АТФтезисы доклада Тезисы
- Авторы: Третьяков Д.О., Лапашина А.С., Фенюк Б.А.
- Сборник: III Объединенный научный форум физиологов, биохимиков и молекулярных биологов. VII съезд биохимиков России. X Российский симпозиум "Белки и пептиды". VII съезд физиологов СНГ. Сочи, Дагомыс, 3–8 октября 2021. Научные труды
- Том: 2
- Тезисы
- Год издания: 2021
- Издательство: Общество с ограниченной ответственностью Издательство Перо
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 84
- Последняя страница: 84
- Аннотация: Множество ферментативных реакций сопряжено с образованием или затратой АТФ. Однако существующие на сегодняшний день методы измерения скорости этих реакций in vitro имеют ряд ограничений в использовании. Ни один из них непозволяет в реальном времени наблюдать за изменением концентрации АТФ в условиях, приближенных к физиологическим (в присутствии АДФ и нескольких мМ неорганического фосфата). Целью данной работы являлась постановка метода количественного измерения изменений концентрации АТФ in vitro в режиме реального времени с использованием флуоресцентных белковых зондов. Эти зонды содержат субъединицу ε бактериальной АТФ-синтазы, конформационный переход которойпри обратимом связывании АТФ детектируется за счет изменения спектральных свойств флуоресцентных белков. Новый метод позволяет, варьируя вид зонда и температуру, достаточно точно измерять концентрацию АТФ в пределах одного порядка величины в интервале от 1 мкМ до 10 мМ. Зонды позволяют вести измерения в присутствии АДФ, фосфата, других нуклеотидов, а также в интервале значений рН от 7 до 9, что позволяет приблизиться к физиологическим условиям. Метод был успешно использован для измерения активностей гексокиназы и АТФ-синтазы. Результаты этих измерений были подтверждены альтернативными методами. Таким образом, использование флуоресцентных зондов предоставляет множество новых возможностей для измерения кинетики реакций, протекающих с участием АТФ.Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант 20-14-00268)
- Добавил в систему: Лапашина Анна Сергеевна