ВЛИЯНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ВЕЗИКУЛ ФОЛЛИКУЛЯРНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В СРЕДЕ СОЗРЕВАНИЯ НА СПОСОБНОСТЬ ООЦИТОВ КОРОВ К ЭМБРИОНАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ in vitro ПОСЛЕ СТАРЕНИЯ И ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Аннотация:Внеклеточные везикулы (extracellular vesicles, EVs), выделенные из фолликулярной жид-
кости (ФЖ) яичников, вовлечены in vivo в регуляцию мейоза в женских половых клетках, в связи
с чем в последние годы EVs активно изучаются как потенциальные регуляторы качества ооцитов
с целью повышения эффективности технологии получения эмбрионов in vitro (in vitro embryo pro-
duction, IVP). В представленной работе мы впервые исследовали компетенцию к эмбриональному
развитию у ооцитов коров (Bos taurus) при культивировании в присутствии EVs в процессе созре-
вания и старении in vitro перед экстракорпоральным оплодотворением. Цель представленной ра-
боты заключалась в изучении влияния тестируемых условий на возрастные трансформации в зре-
лых ооцитах в процессе созревания in vitro (in vitro maturation, IVM) с точки зрения их способности
после оплодотворения развиваться до стадии бластоцисты, а также качества получаемых IVP эм-
брионов. EVs из ФЖ выделяли методом дифференциального ступенчатого центрифугирования и
ультрацентрифугирования при 100 000 g. В полученной везикулярной фракции содержание общего
белка составляло 37,5 мкг/мл ФЖ. Образцы проанализировали с использованием трансмиссион-
ной электронной микроскопии, которая подтвердила наличие EVs, соответствующих по размерам
экзосомам, в выделенных препаратах. Для функциональных экспериментов ооцит-кумулюсные
комплексы (ОКК) культивировали с целью созревания в среде ТС-199, содержащей бычий сы-
вороточный альбумин (3 мг/мл), пируват натрия (0,5 мМ) и эпидермальный фактор роста (EGF,
100 нг/мл) в отсутствие (контроль) или в присутствии EVs. Везикулярный белок добавляли в среду
IVM в физиологической концентрации (на 1 мл среды количество EVs, выделенное из 1 мл ФЖ).
Через 24 ч созревания ОКК переносили в среду старения и культивировали еще в течение 12 ч, после
чего подвергали экстракорпоральному оплодотворению и культивированию для эмбрионального раз-
вития. На 3-и сут после оплодотворения изучали морфологию раздробившихся оплодотворенных
ооцитов, на 7-е сут культивирования определяли число эмбрионов, развившихся до стадии бласто-
цисты, и их качество. Последнее оценивали на основании общего числа ядер в эмбрионах, которое
подсчитывали с помощью цитологического анализа. Всего было проведено четыре независимых
эксперимента. Число ОКК в каждой экспериментальной группе варьировало от 116 до 121. Доля
раздробившихся после оплодотворения ооцитов в контроле была ниже, чем в опыте (53,5±2,9
против 63,8±2,9 %, p < 0,05). Также обнаружено положительное влияние EVs на развитие созрев-
ших и стареющих in vitro ооцитов до стадии бластоцисты после оплодотворения. В контроле выход
бластоцист составлял 17,3±1,6 %. Присутствие в среде созревания EVs повышало этот показатель
до 26,5±0,7 % (p < 0,05), при этом качество полученных эмбрионов не ухудшалось. Полученные
данные позволяют сделать вывод, что использование EVs из ФЖ яичников коров в процедуре IVM
повышает устойчивость яйцеклеток к возрастным трансформациям и, как следствие, их компетен-
цию к эмбриональному развитию после старения in vitro и оплодотворения. Также очевидно, что
EVs на этапе экстракорпорального созревания могут быть использованы для повышения эффек-
тивности технологии получения IVP эмбрионов у крупного рогатого скота.