Аннотация:Методом полимеразной цепной реакции получены мутантные формы пероксидазы
табака (ТОР) Gln116Trp и Leu157Trp. Экспрессия этих мутантов была осуществлена
путем клонирования в вектор pET40b и культивированием в штамме E. coli
BL21(DE3) Codon Plus. Уровень экспрессии апобелка пероксидазы табака в выбран-
ном штамме в обоих случаях составил более 40% общего белка. Процедура рефол-
динга мутантных форм была проведена на основе известной методики рефолдинга
рекомбинантной пероксидазы табака дикого типа. Выход реактивации мутантных
форм пероксидазы табака составляет 3–9%, удельная активность по АБТС – 2000–
3000 ед. активности на 1 мг белка. Изучены зависимости скорости окисления АБТС
перекисью водорода от концентрации субстратов. Показано, что данная реакция,
катализируемая мутантными формами, протекает по механизму типа “пинг-понг”,
однако удельная активность по различным субстратам у Gln116Trp и Leu157Trp серь-
езно различается. Таким образом, можно сделать предположение, что остатки трип-
тофана выступают в роли элемента в цепи передачи заряда между активным цент-
ром фермента и субстратом.