|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Применение однодоменных нанотел для определения конформационных изменений трансферрина методом поляризации флуоресценциистатья Исследовательская статья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
- Авторы: Мухаметова Л.И., Еремин С.А., Михура И.В., Горяйнова О.С., Сачко А.М., Иванова Т.И., Тиллиб С.В.
- Журнал: Биоорганическая химия
- Том: 51
- Номер: 2
- Год издания: 2025
- Издательство: Российская академия наук
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 280
- Последняя страница: 290
- DOI: 10.31857/S0132342325020063
- Аннотация: Трансферрин (Tf) в плазме крови существует в двух формах: железосодержащей holo-Tf и железонесодержащей apo-Tf формах. Количественное соотношение этих форм в плазме крови человека –важный биохимический маркер заболеваний, связанных с дефицитом или избытком железа. Применение метода поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (FPIA) и использованиерекомбинантных нанотел верблюда в качестве распознающего реагента для экспрессного определенияholo-Tf и apo-Tf позволит разработать быстрые метод определения двух конформаций трансферрина.Синтезированы и охарактеризованы конъюгаты нанотел верблюда aTf1 и aTf2 к holo- и аpo-формамTf человека c флуоресцеинизотиоцианатом (FITC). Подобраны концентрации конъюгатов FITCaTf1 и FITC-aTf2 (2.5–5 нМ) с оптимальным соотношением сигнал/шум и исследована кинетикасвязывания FITC-aTf1 и FITC-aTf2 с holo- и apo-Tf методом поляризации флуоресценции. Показано,что полное связывание конъюгатов FITC-aTf1 и FITC-aTf2 с holo- и apo-Tf наблюдается через 15 и5 мин инкубации соответственно. Определены равновесные константы диссоциации комплексовFITC-aTf1*holo-Tf и FITC-aTf2*apo-Tf, которые составили 30.7 ± 0.3 и 15.3 ± 0.2 нМ, соответственно.Продемонстрировано, что инкубация конъюгатов FITC-aTf1 и FITC-aTf2 с другими белкамичеловека – лактоферрином, сывороточным альбумином и лизоцимом – не приводит к изменениюсигнала поляризации флуоресценции, что свидетельствует о высокой специфичности анализа.Показано, что пары реагентов FITC-aTf1/apo-Tf и FITC-aTf2/holo-Tf не демонстрировали связываниямежду собой, что подтверждает аффинность конъюгатов FITC-aTf1 и FITC-aTf2 к holo- и apo-Tf,соответственно. В данной работе показана возможность определения двух форм трансферрина вфизиологических жидкостях человека методом FPIA, которое может иметь диагностическое значение,а применение портативного флуоресцентного анализатора позволит проводить данный анализ внестен специализированных лабораторий.
- Добавил в систему: Мухаметова Лилия Инилевна
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|