|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Метилзависимые эндонуклеазы как инструмент определения активности эукариотической ДНК-метилтрансферазы Dnmt3aстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
- Авторы: Сергеев А.В., Кирсанова О.В., Громова Е.С.
- Журнал: Acta Naturae (русскоязычная версия)
- Том: 9
- Номер: спецвыпуск-2017
- Год издания: 2017
- Издательство: Парк-медиа
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 139
- Последняя страница: 140
- Аннотация: Разработан новый метод определения активности МТазы мыши Dnmt3a in vitro c использованием недавно охарактеризованных метилзависимых (МЗ) эндо-нуклеаз рестрикции, специфически расщепляющих метилированную ДНК. Суть метода состоит в последовательном проведении реакций метилирования МТазой Dnmt3a и расщепления МЗ-эндонуклеазами специально сконструированных ДНК-субстратов с последующим анализом продуктов расщепления в денатурирующем полиакриламидном геле по флуоресцентной метке. Были изучены МЗ-эндонуклеазы KroI и PcsI, а также для сравнения и контроля традиционная эндонуклеаза Hin6I, которая не расщепляет метилированную ДНК. Наиболее перспективной оказалась МЗ-эндонуклеаза PcsI, которая в своем участке узнавания содержит две последовательности CpG, разделенные семью парами нуклеотидов, что примерно соответствует расстоянию между активными центрами в каталитически активном тетрамере Dnmt3a. Был создан ДНК-субстрат для тестирования активности Dnmt3a с двумя CpG на указанном расстоянии. В обе последовательности CpG предварительно ввели по одной метильной группе в противоположные цепи в соответствии с необходимым для метилирования расположением цитозинов-мишеней в комплексе Dnmt3a с ДНК. МЗ-эндонуклеаза KroI может иметь лишь ограниченное применение для определения активности Dnmt3a ввиду неполного расщепления метилированного субстрата. В отличие от традиционных методов определения активности МТаз, основанных на использовании радиоактивно меченного S-аденозил-L-метионина, данный метод является надежным, простым в исполнении и недорогим.
- Добавил в систему: Громова Елизавета Сергеевна
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | Полный текст | Skan_Sergeev.png | 149,8 КБ | 7 сентября 2018 [esgromova] |