|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Нокаут генов в индуцированных плюрипотентных стволовых клетках человека при помощи системы crispr/cas9 и отбор клонов при помощи различных методов скринингакнига
- Авторы: Дашинимаев Э.Б., Артюхов А.С., Мещерякова Н.В., Василенко Ю.С., Гольцова А.С., Щепетов Д.М., Чичерин И.В., Воротеляк Е.А., Васильев А.В.
- Год издания: 2020
- Издательство: Изд-во СО РАН
- Местоположение издательства: Новосибирск
- Объём: 28 страниц
- ISBN: 978-5-7692-1670-1
- Академическое издание
- DOI: 10.15372/METHODS2020ZSM
- Аннотация: Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) человека являются удобным и перспективным ресурсом клеток, поскольку их можно дифференцировать практически во все типы стволовых и прогениторных клеток взрослого организма. Данное свойство можно использовать в различных областях регенеративной медицины и фундаментальной клеточной биологии. В связи с бурным развитием систем редактирования генома, а именно CRISPR/Cas9, стали актуальны методы нокаутирования различных генов в культурах клеток, в том числе и в ИПСК. Так, например, нокаут различных генов в ИПСК поможет выявить роль этих генов в процессах развития и дифференцировки. Однако, учитывая особенности культивирования ИПСК in vitro, например, обычно низкую эффективность трансфекции, крайне низкую способность к клонированию малым разведением, а также их свойство расти в плотных колониях, получение отдельных клонированных линий ИПСК с нужной мутацией представляет собой определенную проблему. Мы постарались суммировать несколько методов (электропорация, клеточный сортинг, скрининг клонов, в том числе при помощи цифровой капельной ПЦР) в один протокол получения линий ИПСК с нокаутированными генами.
- Добавил в систему: Чичерин Иван Владимирович