ИСТИНА

В отчете представлены наиболее значимые результаты, полученные в рамках многолетнего эволюционного эксперимента, проводимого на копротрофном сордариевом грибе Podospora anserina (Rabenh.) Niessl в качестве модельного объекта. Цель настоящего исследования – изучение необратимой изменчивости P. anserina, которая имеет место при долгосрочном непрерывном поддержании роста мицелия на жидкой питательной среде в лабораторных условиях. Эксперимент был заложен в 2012 году на кафедре микологии и альгологии биологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова и продолжается по сей день. В 2016 году методом полногеномного секвенирования «следующего поколения» (next-generation sequencing, NGS) были определены последовательности ДНК 3 из 8 независимых экспериментальных линий P. anserina во второй временной точке (130-й пассаж от старта эксперимента) – результаты были сопоставлены с полученными ранее данными по первой временной точке (64-й пассаж от старта эксперимента). Обнаружены de novo мутации в генах, значимых для жизнедеятельности данного гриба. Из 23 однонуклеотидных замен 18 попали в кодирующие области (две приводят к преждевременной остановке трансляции, 13 — к аминокислотной замене, 3 — не меняют аминокислоту), 5 не попали в проаннотированные белки. При этом все замены, попавшие в кодирующие области, относятся к белкам с полной аннотацией (с целиком определёнными экзонами). Ни один из полиморфизмов не попал в интроны. В отчете обсуждается возможное влияние этих мутаций на фенотип P. anserina. На ультраструктурном уровне обнаружены отличия изолятов из глубинных культур от штаммов P. anserina дикого типа, растущих исключительно на агаризованной среде: ярче всего прослеживается тенденция к самопоглощению значительных участков цитоплазмы за счет деятельности лизосомальной и/или вакуолярной системы клеток, чего никогда не наблюдали в клетках контрольных диких вариантов. Сформированный комплекс морфофизиологическихлогических признаков не нарушается даже при длительном инкубировании экспериментальных изолятов на природном субстрате P. anserina – навозе травоядных животных. Возвращение видоизмененного мицелия P. anserina в условия, близкие к природным (культивирование на навозе козы), не приводит к возвращению каких-либо признаков исходных диких вариантов. Подтверждено, что фертильность, как и целый ряд других признаков, утраченных грибом в ходе долгосрочного эксперимента, не восстанавливается при смене условий культивирования. Получаемые нами морфофизиологические варианты P. anserina стабильны. Участники временного творческого коллектива в 2016 году опубликовали 4 тезисов конференций, соответствующих тематике данного проекта, и выступили с 2 докладами.