ИСТИНА

В результате проведенных исследований была продемонстрирована экспрессия гена галактозидазы в развивающиеся эмбрионы мыши (при трансфекции на стадиях двухклеточного эмбриона, морулы и бластоцисты),была изучена топография распределения в клетках развивающихся эмбрионах млекопитающих. Репортерный гена в-галактозидазы и ген неомицинтрансферазы (под SV и RSV промоторами) вводили в развивающиеся эмбрионы мыши, свиньи и кролика на стадиях морулы и бластоцисты методом баллистической трансфекции. Около 70 % эмбрионов пережила процедуру обстрелa. Через двое суток развития в культуре in vitro 30-40% эмбрионов имели активность гена в-галактозидазы в клетках внутренней клеточной массы. Микроскопические наблюдения на полутонких срезах показали проникновение микрочастиц вольфрама во все ткани эмбриона, включая внутриклеточную клеточную массу. Микрочастицы располагались как в цитоплазме, так и в ядре. Методами дот-блот гибридизации и (или) PCR было показано присутствие трансгена в тканях эмбрионов 14-17 дней развития и в околоплодных оболочках. Однако в постимплантационных эмбрионах мыши (6,5 и 7,5 сутки развития и на более поздних этапах развития) экспрессия гена в-галактозидазы была обнаружена только в экстраэмбриональных тканях. В последующих экспериментах баллистичским методом проводилась трансфекция соматических тканей мышей in vivo, в частности в мышечные ткани. Показана долговременная экспрессия введенного гена бета-галактозидазы непосредственно в мышечных волокнах, а не в соединительнотканых элементах мышц. Таким образом показана эффективность баллистического метода для трансфекции тканей млекопитающих на всех стадиях онтогенеза. Эти результаты дают возможность использовать данный методический подход для генной терапии некоторых генетических заболеваний, в частности миодистрофии.