ИСТИНА

Проект посвящен выявлению молекулярных коррелятов механочувствительных кальций-проводящих каналов в трансформированных клетках. Основными кандидатами являлись каналы семейства TRP и Piezo. В экспериментах с использованием метода патч-кламп при отведении от участка нативной клетки (cell-attached) исследовалась активация механочувствительных каналов в присутствии фармакологических блокаторов белков-кандидатов на роль кальций-проводящих механочувствительных каналов. Результаты электрофизиологических опытов с фармакологическими блокаторами позволили сделать выводы о маловероятной принадлежности исследуемых каналов к семейству TRP. Таким образом, основными кандидатами представляются белки семейства Piezo. С помощью ОТ-ПЦР показана экспрессия гена белка Piezo1 в трансформированных фибробластах мыши 3T3B-SV40 и клетках миелоидной лейкемии человека K562. Имуннофлуоресцентное мечение подтвердило присутствие белков Piezo1 в плазматической мембране клеток. Была выявлена преимущественная локализация Piezo1 в ламеллоподиях. Не было обнаружено со-локализации Piezo1 и маркера липидных микродоменов ганглиозида GM1. Были идентифицированы ионные каналы, не реагирующие на натяжение клеточной мембраны, но активирующиеся в ответ на разборку актинового цитоскелета, т.е. также в какой-то мере являющиеся механоазависимыми - это амилорид-нечувствительные эпителиальные натриевые каналы. Было показано, что в различных типах клеток присутствуют кальций-сопряженные комплексы механочувствительных кальций-проницаемых катионных каналов и кальций-активируемых калиевых каналов, которые могут отличаться по составу. Данные, полученные в ходе первого этапа проекта, позволяют перейти к следующим этапам работы – исследованию роли белков Piezo в клеточной подвижности, миграции и кальциевой сигнализации в трансформированных клетках.