ИСТИНА

Показано, что мелиттин необратимо ингибирует Na,K-АТФазу и Са-АТФазу саркоплазматического ретикулума (СР). При молярном соотношении мелиттин:АТФаза 50:1 и рН 7,0 зависимость ингибирования от времени для обеих АТФаз представляет собой сумму двух экспонент, характеризующих быструю неполную фазу ингибирования (около 50% ) с константой скорости 1,2-1,6 мин-1 и медленную фазу с константой скорости 0,1-0,15 мин-1. АТФ защищает обе АТФазы от ингибирования, устраняя быструю фазу. Зависимость защитного эффекта от концентрации АТФ свидетельствует о связывании нуклеотида в аллостерическом центре. В диапазоне рН 6,0- 8,5 наблюдается увеличение скорости ингибирования в быстрой фазе, для Са-АТФазы этот процесс зависит от ионизации группы с рК 6,5, для Na,K-АТФазы - от ионизации групп с рК около 6,5 и 8,0. В растворах высокой ионной силы ингибирование Са-АТФазы мелиттином становится неполным и однофазным с константой скорости, соответствующей быстрой фазе ингибирования. В присутствии мелиттина наблюдается образование олигомеров Са- и Na,K-АТФазы. Показано отсутствие корреляции между процессом олигомеризации и ингибированием Са-АТФазы. При добавлении мелиттина к мембране СР происходит быстрое устранение заряда мембраны, после чего наблюдается изменение микровязкости фосфолипидного бислоя и конформации фермента, протекающие со скоростью, соответствующей медленной фазе ингибирования. В присутствии детергентов осуществляется фосфорилирование Na,K- и Н,К-АТФазы протеинкиназой А. Подобран детергент и другие условия, обеспечивающие высокую стехиометрию фосфорилирования Na,K-АТФазы с минимальной потерей активности. В этих условиях увеличение включения фосфата в сериновый остаток -субъединицы фермента под действием протеинкиназы А приводит к нарастающему ингибированию Na,K-АТФазы. Характер ингибирующего действия мелиттина на Na,K-АТФазу, фосфорилированную протеинкиназой А со стехиометрией 0,5 моль/моль -субъединицы, не изменяется. Аннексин VI в концентрации 0,2-1 мкМ в присутствии низких концентраций АТФ активирует Na,K-АТФазу на 20-40%. Аннексин не влияет на ингибирование Na,K- АТФазы мелиттином. Из слизистой оболочки желудка кролика получен белок с молекулярной массой 68 кДа, реагирующий с антителами на мелиттин (мелиттин-подобный белок, МПБ). В концентрациях 0,5-2 мкМ МПБ активирует Са-АТФазу СР и транспорт Н+, обеспечиваемый Н,К-АТФазой, а также влияет на флуоресценцию Na,K-АТФазы, меченой флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ). Установлено, что Na,K-АТФаза и Са-АТФаза образуют комплексы с анкирином, полученным из эритроцитов свиньи. С использованием Na,K-АТФазы, меченой ФИТЦ, показано, что анкирин взаимодействует с ферментом, находящимся в Е2-конформации.