ИСТИНА

В последние годы для лечения критической ишемии нижней конечности (КИНК) наиболее перспективным направлением является терапевтический ангиогенез с применением методов генной терапии. Среди векторных систем преимуществом с точки зрения безопасности обладают плазмиды. Представленная в данном исследовании бицистронная плазмида pHGF/VEGF позволяет одновременно доставлять гены двух ангиогенных факторов роста (АФР), комбинация которых на данных момент является одной из самых эффективных [1]. Благодаря наличию в составе плазмиды двух независимых экспрессионных кассет при эффективности трансфекции в 71,96%±0,3% достигается практически эквимолярная концентрация целевых белков - 1:1,62 (HGF/VEGF165), что благоприятно для активации ангиогенеза. Предыдущие исследования плазмиды pHGF/VEGF доказали ее высокую эффективность относительно уменьшения распространения площади некроза в ишемизированной скелетной мышце и активации ангиогенеза [2]. В изучении возможного миогенного эффекта выяснилось, что pHGF/VEGF не обладает выраженным влиянием на образование и рост новых миофибрилл в ишемизированной скелетной мышце. С другой стороны, данный факт свидетельствует о безопасности плазмидного вектора относительно митогенной активности. Также в данной работе было впервые исследовано влияние экспрессируемых факторов (VEGF165 и HGF) на аксональный рост в средах после трансфекции HEK293T плазмидой pHGF/VEGF. Было установлено, что выраженный рост и ветвление аксонов не наблюдается при воздействии АФР по сравнению со всеми отрицательными контролями, однако, с другой стороны, и не подавляется. Для клинической картины КИНК характерно наличие воспалительных процессов. По результатам исследования, один из контролей которого - препарат сравнения “Неоваскулген” (ПАО «Институт стволовых клеток человека», Россия), pHGF/VEGF способствует уменьшению воспаления путем снижения инфильтрации макрофагов в ишемизированной мышце. Особенно выражен этот эффект в сравнении с “пустым” вектором (pVAX2), для которого характерно развитие иммунного ответа. Фенотипирование макрофагов позволило детально проанализировать инфильтрацию ишемизированной мышцы: оценивалась как вся популяция CD68+, так и только М2+ субпопуляция. В результате генной терапии с использованием pHGF/VEGF количество M2+ макрофагов в повреждённой ткани значительно возрастало по сравнению со всеми контрольными группами, а также препаратом сравнения “Неоваскулген”, что свидетельствует в пользу противовоспалительного действия исследуемого вектора. 1. Makarevich P. I. et al. Angiogenic and pleiotropic effects of VEGF165 and HGF combined gene therapy in a rat model of myocardial infarction // PLOS ONE. 2018. Vol. 13 № 5. P. 1–25. 2. Slobodkina E. et al. Therapeutic Angiogenesis by a “Dynamic Duo”: Simultaneous Expression of HGF and VEGF165 by Novel Bicistronic Plasmid Restores Blood Flow in Ischemic Skeletal Muscle // Pharmaceutics. 2020. Vol. 12. № 12. P. 1-23.