Аннотация:Иммортализованные кератиноциты НаСаТ считаются условно
нормальными и служат модельной системой для изучения дифференцировки
и дисфункций кожи человека. При этом в популяции встречаются клетки
разной плоидности и клетки с микроядрами (МЯ). МЯ являются причиной
генетической нестабильности, однако НаСаТ сохраняют
нетрансформированный статус с 1988 г. По-видимому, в культуре
реализуются механизмы, позволяющие избегать трансформации. Цель
работы: выяснение пути образования клеток с МЯ и их дальнейшей судьбы в
культуре НаСаТ. МЯ окрашивали DAPI, для прижизненных исследований
использовали ПО Vision Bio «West Medica». Оценку плоидности проводили в
программе Fiji и с помощью проточной цитофлуориметрии.
В популяции НаСаТ число клеток с МЯ на 1 сут после пересева
составляет 4,5%, к 3 сут их число увеличивается до 12,1% и снижается к 6 сут
до 10,1%. Было выделено 5 типов клеток с МЯ: клетки с мелкими (до 4 мкм2)
одиночными и множественными МЯ, клетки с крупными одиночными и
множественными МЯ и клетки с множественными МЯ, не содержащие
основного ядра. Число клеток с мелкими одиночными МЯ в процессе
культивирования не меняется. Увеличение числа клеток с МЯ на 3 сут
происходит за счет остальных 4 типов. Уменьшение числа клеток с МЯ к 6
сут происходит за счет снижения числа клеток с мелкими множественными и
одиночными крупными МЯ. Число клеток с множественными крупными МЯ
и клеток без основного ядра продолжает увеличиваться.
Клетки с множественными МЯ формируются в результате
патологических митозов полиплоидных клеток. В культуре НаСаТ число
клеток с повышенной плоидностью увеличивается с 3,9% (1 сут) до 16,5%(3
сут). Число патологических митозов при этом составляет около 0,7%. К 6 сут
культивирования число полиплоидных клеток возвращается к исходному
уровню; число патологических митозов так же снижается до 0,2%, при этом
митотический индекс в популяции не меняется и составляет около 3,5%.
Апоптотический индекс возрастает с 1,6% на 1 сут до 1,9% на 3 сут и 3,7% на
6 сут.
Прижизненные наблюдения показали, что 60% клеток с множественными
МЯ гибнут путем апоптоза. Клетки с крупными (предположительно
полиплоидными) ядрами на 3-4 сутки культивирования вступают в
патологический митоз (10 из 15), заканчивающийся образованием 2-5 клеток
с МЯ; 60% дочерних клеток вступают в апоптоз.
Возможно, в культуре НаСаТ спонтанно возникающие полиплоидные
клетки вступают в патологический митоз, завершающийся образованием
клеток с МЯ, которые элиминируются путем апоптотической гибели.
НИР121032300098-5