|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Анализ активности стероидогенного регуляторного белка острой фазы (STARD1) человека в клетках Escherichia coliстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
- Авторы: Замалутдинова С.В., Исаева Л.В., Замалутдинов А.В., Фалетров Я.В., Рубцов М.А., Новикова Л.А.
- Журнал: Биохимия
- Том: 87
- Номер: 9
- Год издания: 2022
- Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 1334
- Последняя страница: 1341
- Переводные версии: Analysis of Activity of Human Steroidogenic Acute Regulatory Protein (STARD1) Expressed in Escherichia coli Cells , Analysis of Activity of Human Steroidogenic Acute Regulatory Protein (STARD1) Expressed in Escherichia coli Cells
- DOI: 10.31857/S0320972522090111
- Аннотация: Одним из главных препятствий для успешного использования в биотехнологических процессах рекомбинантных клеток E. coli с реконструированными в них энзиматическими системами, способными осуществлять трансформацию стероидов, является неэффективный транспорт в клетки стероидных субстратов. В работе тестирована возможность использования белка-переносчика холестерола человека - стероидогенного регуляторного белка острой фазы (StARD1), для повышения эффективности поглощения стероидов клетками бактерий. Получены генетические конструкции для синтеза в клетках E. coli BL21(DE3) делетированной версии белка StARD1, включающей функциональный домен (66-285 аминокислотные остатки), или белка StARD1(66-285)-GFP, слитых с N-концевой сигнальной последовательностью бактериального белка pelB, адресующей белок в периплазму. Анализ препаратов клеток E.coli/pET22b/STARD1-GFP с использованием флуориметрии и Вестерн-иммуноблоттига подтвердил, что использованная система экспрессии обеспечивает синтез полноразмерного STARD1, слитого с репортерным белком. С использованием флуоресцентной спектроскопии показано, что присутствие StARD1 обеспечивает увеличение эффективности ассимиляции NBD-меченых аналогов холестерола клетками E.coli/pET22b/STARD1 в 1,7+ 0,2 – 2,8 + 0,4 раза в сравнении с клетками дикого штамма (3-24 час культивирования).Таким образом, впервые обнаружено, что STARD1 человека способен проявлять функциональную активность в клетках бактерий, что открывает перспективы для изучения характеристик этого чрезвычайно значимого с медицинской точки зрения регуляторного белка invivoc использованием модельных систем на основе клеток бактерий. Предложенный в данной работе фундаментально новый подход - включение специфического белка-переносчика в мембрану клетки для повышения эффективности поглощения стероидов, является перспективным и может расширить арсенал методов, использующихся при создании штаммов микроорганизмов для синтеза широко востребованных стероидных соединений.
- Добавил в систему: Новикова Людмила Александровна